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            冷凍細胞活化操作

            時間:2017/3/23閱讀:410
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            1、ATCC細胞冷凍細胞之活化原則為快速解凍,以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害,導致細胞之死亡。

            2、細胞活化后,約需數(shù)日,或繼代一至二代,其細胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復正常(例如產生單株抗體或是其它蛋白質)。

            3、材料

            37℃恒溫水槽、新鮮培養(yǎng)基、無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶、液氮或干冰容器

            4、ATCC細胞步驟:

            (1)操作人員應戴防護面罩及手套,防止冷凍管可能爆裂之傷害。

            (2)自液氮或干冰容器中取出冷凍管,檢查蓋子是否旋緊,由于熱脹冷縮過程,此時蓋子易松掉。

            (3)將新鮮培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內。

            (4)取出冷凍管,立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,以70%酒精擦拭保存管外部,移入無菌操作臺內。

            (5)取出解凍之細胞懸浮液,緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(稀釋比例為1:10~1:15),混合均勻,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取0.1ml解凍細胞懸浮液作存活測試。

            (6)解凍后是否立即去除冷凍保護劑(例如DMSO或glycerol),依細胞種類而異,一般而言,大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除,則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10ml培養(yǎng)基之離心管內,離心1000rpm,5分鐘,移去上清液,加入新鮮培養(yǎng)基,混合均勻,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

            (7)若不需立即去除冷凍保存劑,ATCC細胞則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。

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