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ATCC細胞取材進行原代培養(yǎng)時常常需要將組織塊消化解離形成細胞懸液,傳代培養(yǎng)時也需要將貼壁細胞從瓶壁上消化下來,常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和edta溶液,有時也用膠原酶(collagenase)溶液。
1.胰酶溶液:胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示,常見有1:125和1:250,即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。組織培養(yǎng)用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%濃度,配制時要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡鹽溶液(如前面的D-Hank"s),因為這些物質會對胰酶產生抑制作用。胰酶作用及溶解的*pH是8-9,配制胰酶溶液應將液體調至pH8左右,充分溶解,過濾除菌。過濾后可以再調只pH7.5,也可不調。
使用細胞清洗液配制胰酶消化液:含0.5%胰酶的ATCC細胞清洗液(100ml細胞清洗液加0.5g胰酶),過濾除菌,分裝于4度保存。
2.EDTA溶液:EDTA溶液也常用來解離細胞,它的作用機制是破壞細胞間的連接。對于一些貼壁特別牢固的細胞,還可以用EDTA和胰酶的混合液進行消化。EDTA溶液的使用濃度為0.02%,配制時應加堿助溶,配制后可過濾除菌,也可高溫消毒滅菌。
3.膠原酶溶液:膠原酶在上皮類細胞原代培養(yǎng)時經常使用,膠原酶作用的對象是膠原組織,因此不容易對ATCC細胞產生損傷。膠原酶的使用濃度為0.1-0.3mg/L或200000U/L,作用的*pH為6.5。膠原酶不受Ca2+、Mg2+及血清的抑制,配制時可用PBS。
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