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            上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
            中級會(huì)員 | 第10年

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            ATCC細(xì)胞
            蛋白質(zhì)產(chǎn)品
            核酸擴(kuò)增產(chǎn)品
            elisa試劑盒
            生化試劑
            PCR試劑盒
            標(biāo)準(zhǔn)品
            PCR鑒定
            生化試劑盒
            科研細(xì)胞
            分子生物學(xué)試劑
            ELISA實(shí)驗(yàn)檢測
            蛋白
            抗體

            結(jié)晶紫檢測法檢測細(xì)胞生長

            時(shí)間:2017/4/18閱讀:928
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            1.腫瘤細(xì)胞在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板各孔中加0.1ml含5×104~10×4 WEHI-164細(xì)胞的培養(yǎng)液(含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液),37℃ 5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3小時(shí),讓細(xì)胞帖壁。

            2.用RPMI-1640培養(yǎng)液10倍遞次稀釋TNF標(biāo)準(zhǔn)品,根據(jù)需要3~5倍遞次稀釋待檢樣品,每孔加0.1ml稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品或待檢樣品,每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)孔。對照孔6個(gè),3個(gè)陽性對照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培養(yǎng)液,3個(gè)陰性對照孔各加100μl RPMI-1640培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)18~24小時(shí)。

            3.甩去培養(yǎng)液,用PBS小心洗滌一次,每孔加0.1ml 10%甲醇溶液固定腫瘤細(xì)胞30秒鐘。

            4.吸去甲醇溶液,每孔加0.1ml結(jié)晶紫染液,室溫中放置20分鐘。

            5.輕輕甩去染色液,用蒸餾水洗滌各孔,將培養(yǎng)板倒置于吸水紙上吸干水分。自然干燥或37℃烘干。此板可以在室溫中長期保存。

            6.測定前,每孔加0.1ml 33%醋酸脫色,充分振蕩后在570nm處測定光吸收度。用光吸收度(OD)值對樣品稀釋度作圖,比較標(biāo)準(zhǔn)品曲線和待檢樣品曲線即可得到待測樣品中的腫瘤細(xì)胞因子活性。

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