您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)! 登錄| 免費(fèi)注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>結(jié)晶紫檢測法檢測細(xì)胞生長
1.腫瘤細(xì)胞在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板各孔中加0.1ml含5×104~10×4 WEHI-164細(xì)胞的培養(yǎng)液(含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液),37℃ 5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3小時(shí),讓細(xì)胞帖壁。
2.用RPMI-1640培養(yǎng)液10倍遞次稀釋TNF標(biāo)準(zhǔn)品,根據(jù)需要3~5倍遞次稀釋待檢樣品,每孔加0.1ml稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品或待檢樣品,每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)孔。對照孔6個(gè),3個(gè)陽性對照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培養(yǎng)液,3個(gè)陰性對照孔各加100μl RPMI-1640培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)18~24小時(shí)。
3.甩去培養(yǎng)液,用PBS小心洗滌一次,每孔加0.1ml 10%甲醇溶液固定腫瘤細(xì)胞30秒鐘。
4.吸去甲醇溶液,每孔加0.1ml結(jié)晶紫染液,室溫中放置20分鐘。
5.輕輕甩去染色液,用蒸餾水洗滌各孔,將培養(yǎng)板倒置于吸水紙上吸干水分。自然干燥或37℃烘干。此板可以在室溫中長期保存。
6.測定前,每孔加0.1ml 33%醋酸脫色,充分振蕩后在570nm處測定光吸收度。用光吸收度(OD)值對樣品稀釋度作圖,比較標(biāo)準(zhǔn)品曲線和待檢樣品曲線即可得到待測樣品中的腫瘤細(xì)胞因子活性。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。