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            培養(yǎng)干細胞的凍存

            時間:2017/8/1閱讀:436
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            干細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-196℃液氮中,儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。 
            1. 凍存細胞 
            (1)選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染),在凍存前1d換液。 
            (2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液,計數(shù),使細胞密度達5×10 7 /ml左右密度,離心,去上清。 
            (3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點降低,使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外。 
            (4)分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液。 
            (5)旋好凍存管并仔細檢查,一定要蓋緊,做好標記。 
            (6)凍存:在特殊的 儀器 或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時間內(nèi),下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度,過快能影響細胞內(nèi)水分透出,太慢則促進冰晶形成。 
            操作時應戴防護眼鏡和手套,以免液氮凍傷。 細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-196℃液氮中,儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。 
            1. 凍存細胞 
            (1)選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染),在凍存前1d換液。 
            (2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)干細胞制備成懸液,計數(shù),使細胞密度達5×10 7 /ml左右密度,離心,去上清。 
            (3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點降低,使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外。 
            (4)分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液。 
            (5)旋好凍存管并仔細檢查,一定要蓋緊,做好標記。 
            (6)凍存:在特殊的 儀器 或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時間內(nèi),下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度,過快能影響細胞內(nèi)水分透出,太慢則促進冰晶形成。 
            操作時應戴防護眼鏡和手套,以免液氮凍傷。 
            NK-2R peptide  神經(jīng)激肽A受體(多肽抗原)    *    規(guī)格:     0.5mg
            Calpain 1  鈣蛋白酶(多肽)    進口/國產(chǎn)    規(guī)格:     0.5mg
            Tanis/SELS (Selenoprotein S)又稱SELS  炎癥負調(diào)控因子蛋白(抗原)    現(xiàn)貨供應    規(guī)格:     0.5mg
            Tau protein  微管相關(guān)蛋白(抗原)    *    規(guī)格:     0.5mg
            干細胞

             

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