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當(dāng)前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>ATCC細(xì)胞獲得無限表達(dá)所需是試劑
(1)ATCC細(xì)胞瞬時表達(dá):通??梢允沟鞍自诩?xì)胞中暫時表達(dá)數(shù)天到數(shù)周。瞬時表達(dá)常用于驗證cDNA是否能夠指導(dǎo)蛋白的合成,比較表達(dá)同一蛋白的不同載體的有效性,在進行建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系之前,通過瞬時表達(dá)來驗證重組表達(dá)載體的正確性是十分必要的。然而,瞬時表達(dá)難以按比例產(chǎn)生大量蛋白質(zhì)(>1mg),此外,整個細(xì)胞群體中只有部分細(xì)胞暫時得到蛋白表達(dá),不利于細(xì)胞表型的研究。
(2)穩(wěn)定表達(dá):通過利用共轉(zhuǎn)染的標(biāo)記篩選系統(tǒng),如G418等,對DNA轉(zhuǎn)染后的哺乳動物細(xì)胞進行選擇,使質(zhì)粒DNA穩(wěn)定整合到宿主細(xì)胞染色體上,則可以獲得無限表達(dá)所需蛋白的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。
(3)誘導(dǎo)表達(dá):可誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)使外源基因的表達(dá)受誘導(dǎo)刺激強度控制,避免持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)某些蛋白帶來的細(xì)胞毒性,zui常用的是四環(huán)素(tetracyrcline,tet)調(diào)控的可誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng),具有嚴(yán)密、、可控制性強的優(yōu)點。該系統(tǒng)由調(diào)節(jié)質(zhì)粒和反應(yīng)質(zhì)粒組成,有兩種調(diào)節(jié)方式:①tet-off,四環(huán)素存在時外源基因表達(dá)受抑制,而去除四環(huán)素后誘導(dǎo)基因表達(dá);②tet-on則相反,培養(yǎng)基中有四環(huán)素時表達(dá)外源基因,無四環(huán)素時基因表達(dá)受抑制。tet-on系統(tǒng)更容易操作,避免誘導(dǎo)蛋白時清洗四環(huán)素的步驟,由于普通血清含有四環(huán)素而容易誘導(dǎo)不必要的蛋白表達(dá),因此tet-on細(xì)胞需要在無四環(huán)素的血清中培養(yǎng)。
除了質(zhì)粒表達(dá)載體以外,病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移也是將外源DNA引入不同類型細(xì)胞的有效而方便的方法,痘苗病毒是常用系統(tǒng)之一。痘苗病毒載體中必須表達(dá)cDNA而不是基因組克隆,病毒在感染后6小時開始形成,一直持續(xù)2天。痘苗病毒表達(dá)系統(tǒng)能表達(dá)多個蛋白或表達(dá)多亞基酶的幾個亞基,例如,ATCC細(xì)胞含有不同cDNA的DTM-1載體可以共轉(zhuǎn)染到表達(dá)噬菌體T7聚合酶的細(xì)胞中以研究多種蛋白的表達(dá),對研究多亞基蛋白復(fù)合物的組織尤其有用。
對照品 磺胺嘧啶 100mg 對照品
對照品 炔諾孕酮 100mg 對照品
對照品 甲萘醌 50mg 對照品
對照品 甲巰咪唑 100mg 對照品
對照品 甲氧芐啶 100mg 對照品
對照品 己酸羥孕酮 50mg 對照品
對照品 己烯雌酚 50mg 對照品
ATCC細(xì)胞
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