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小鼠白介素1βELISA試劑盒試劑準(zhǔn)備:
1. 試劑回溫:首先在實(shí)驗(yàn)前 30 min 將試劑盒,待測(cè)樣本放置于室溫下,濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,請(qǐng)放入 37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。
2. 配制洗滌液:預(yù)先計(jì)算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應(yīng)用液,未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋?zhuān)杭尤霕?biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1)1ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為2000pg/ml),然后在1000pg/ml及以后各濃度離心管中分別加入500ul標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1)。再按照以下濃度進(jìn)行2倍稀釋?zhuān)?000、500、250、125、62.5、31.25pg/ml進(jìn)行稀釋。2000pg/ml作為標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)zui高點(diǎn)濃度,0 pg/ml(即只加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1))作為標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)空白對(duì)照。復(fù)溶過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品原液(2000pg/ml)未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20~-80℃冰箱。
4. 生物素化抗體工作液:預(yù)先計(jì)算好試驗(yàn)所需用量,用檢測(cè)稀釋液(SR2)將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應(yīng)用工作液(稀釋前充分混勻),請(qǐng)?jiān)?0分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中。
5. 酶結(jié)合物工作液:按每次試驗(yàn)所需用量配制,用酶結(jié)合物稀釋液(SR3)將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1倍應(yīng)用工作液(稀釋前離心),請(qǐng)?jiān)?0分鐘內(nèi)使用。
6. 洗滌方法:
? 自動(dòng)洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為 300ul/孔,注與吸出間隔為 30 秒,洗板 5 次。
? 手工洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,用洗瓶加入洗滌液300ul/孔,靜止 30 秒后甩凈酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭的吸水紙上拍干,洗板 5 次。
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