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昆蟲卵巢細胞;Sf21復蘇操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
HuH-7人肝癌細胞
RBE, 人肝膽管癌細胞
MiaPaCa-2, 人胰腺癌細胞
KM3, 人多發(fā)性骨髓瘤細胞
QGY-7701, 人肝癌細胞
PANC-1, 人胰腺癌細胞
U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細胞
Hep G2, 人肝癌細胞系
PC-12(高分化),PC12,大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細胞株(高分化)
GH3, 大鼠垂體生長激素腺瘤
Hepa 1-6, 小鼠肝癌細胞
QBC-939, 人膽管癌細胞
B16-F10, 小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細胞
SGC-7901, 人胃腺癌細胞系
SK-N-SH, 人神經(jīng)母細胞瘤細胞
SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細胞
A549, 人肺癌細胞系
SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株
A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株
A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株
SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞
WM35, 人黑色素瘤細胞
BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株
U-2 OS, 人骨肉瘤細胞
WM451, 人黑色素瘤細胞
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞
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