人正常乳腺細(xì)胞；Hs 578Bst圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人正常乳腺細(xì)胞；Hs 578Bst圖片
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  Hs 578Bst來(lái)源于一個(gè)浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(Hs 578T的起源)旁的正常乳房組織。 Hs 578Bst 可能是肌上皮起源的，因?yàn)樗信c體內(nèi)的肌上皮中見到的類似的微絲和叢生的胞飲液泡。 未觀察到橋粒，沒有雌激素受體蛋白，未檢測(cè)到內(nèi)生病毒。  
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；30ng/ml EGF
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 P(10+5)
凍存條件  *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

D/F12 培養(yǎng)基    100mL
D/F12 培養(yǎng)基 ( 含 10% 胎牛血清 )    100mL
DAB 法地高雜交試劑盒    5次
DAB 法生物素雜交試劑盒    5次
DAF-FM DA(NO 熒光探針 )    100 次
Dam 甲基轉(zhuǎn)移酶    500U
Dansyl chloride     100mg
DAPI 干粉    10mg
dATP 溶液，100mM    0.5mL
dATP 溶液，2.5mM    2mL
DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞    10×100μL
DB3.1 菌種    1mL
dCTP 溶液，100mM    0.5mL
dCTP 溶液，2.5mM    2mL
DEAE 交換介質(zhì)    50mLSIRT2 （human recombinant） Direct Assay Reagent （1 ea）SIRT2 （human recombinant）； SIRT2 （human recombinant） Direct Assay Reagent
SPHK Assay ADP （1 ea）SPHK ADP； SPHK Assay ADP
G6P Fluorometric Detector （30 ug）G6P Fluorometric Detector
Glutathione Peroxidase （Control） Assay Reagent （1 ea）Glutathione Peroxidase （Control） Assay Reagent
SOD Assay Buffer （10X） （5 ea）Assay Buffer （10X）； SOD Assay Buffer （10X）
LY255283 （25 mg）1-[5-ethyl-2-hydroxy-4-[[6-methyl-6-（1H-tetrazol-5-yl）heptyl]oxy]phenyl]-ethanone； LY255283
PHOP （1 mg）1-oxazolo[4，5-b]pyridin-2-yl-6-phenyl-1-hexanone； CAY10402|Phenyl hexanoyl oxazolopyridine； PHOP
Assay Buffer （10X） （1 ea）Assay Buffer （10X）
Nω-propyl-L-Arginine （10 mg）N5-[imino（propylamino）methyl]-L-ornithine； Nω-propyl-L-Arginine
Staurosporine （500 ug）2，3，10，11，12，13-hexahydro-10R-methoxy-9S-methyl-11R-methylamino-9S，13R-epoxy-1H，9H-diindolo[1，2，3-gh； 3’，2’，1’-lm]pyrrolo[3，4-j][1，7]benzodiazonin-1-one； Stsp； Staurosporine
Dihydrorhodamine 123 （25 mg）2-（3，6-diamino-9H-xanthen-9-yl）-benzoic acid， methyl ester； DHR； Dihydrorhodamine 123
Prostaglandin A2 methyl ester （50 mg）15S-hydroxy-9-oxo-methyl ester-prosta-5Z，10，13E-trien-1-oic acid； PGA2 methyl ester|Medullin methyl ester； Prostaglandin A2 methyl ester
13，14-dihydro-16，16-difluoro Prostaglandin E1 （1 mg）9-oxo-11α，15S-dihydroxy-16，16-difluoro-prostan-1-oic acid； 15-hydroxy Lubiprostone； 13，14-dihydro-16，16-difluoro Prostaglandin E1
Docosahexaenoyl Serotonin （50 mg）N-[2-（5-hydroxy-1H-indol-3-yl）ethyl]-4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z-docosahexaenamide； Docosahexaenoyl Serotonin
DEAE 葡聚糖    10g
DEAE 葡聚糖凝膠 A-25    25g
DEAE 葡聚糖凝膠 A-50    25g
DEAE 瓊脂糖凝膠 6B    25mL
DEAE 纖維素    100g