人胚胎，皮膚，肌肉；M-20價(jià)格質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。

人胚胎，皮膚，肌肉；M-20價(jià)格操作步驟：

1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性   
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件  *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

蛋白酶 K 干粉    100mg
蛋白酶 K 溶液，10mg/mL    1.5mL
蛋白酶抑制劑混合液    2×0.5mL
蛋白去除試劑 M    5 g 
蛋白去除試劑 S    3g 
蛋白折疊試劑盒    100 次
蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (14.4-97.4KD)    20 次
蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3.3-20.1KD)    15 次
蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (43.0-200.0KD)    10 次
刀豆蛋白 A IV    25mg
刀豆球蛋白 A Ⅲ    50mg
等離子體胺氧化酶    600U
低 pH 緩沖液套裝    30 次Bacterial Protein Extraction Reagent, EZLysEZLys Bacterial Protein Extraction Reagent
DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 1 kDaDiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 1 kDa
20-HETE Lipid Maps MS Standard (500 ug)2-hydroxy Arachidonic Acid, 20-HETE Lipid Maps MS Standard, 2-hydroxy-5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic acid
-+)-2,5-epi Goniothalesdiol (25 mg)-+)-2,5-epi Goniothalesdiol, methyl 3-(3S,4S-dihydroxy-5S-phenyltetrahydrofuran-2R-yl)propanoate
8-iso Prostaglandin A2 (50 mg)8-epi PGA2, 8-iso Prostaglandin A2, 9-oxo-15S-hydroxy-(8.beta.)-prosta-5Z,1,13E-trien-1-oic acid
Metformin (1 g)Biguanide|Cidophage|DMGG|Glucofine, Metformin, N,N-dimethyl-imidodicarbonimidic diamide
5-cis Carbaprostacyclin (10 mg)(5Z)-6a-Carbaprostaglandin I2, 5-cis Carbaprostacyclin, 6,9.alpha.-methylene-11.alpha.,15S-dihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid
PtdIns-(3,4)-P2 (1,2-dipalmitoyl) (sodium salt) (5 mg)Phosphatidylinositol-3,4-diphosphate C-16|DPPI-3,4-P2, PtdIns-(3,4)-P2, 1-(1,2R-dihexadecanoylphosphatidyl)inositol-3,4-bisphosphate, trisodium salt
(R)-(+)-Eicosapentaenyl-1 -Hydroxy-2 -Propylamide (5 mg)(R)-(+)-Eicosapentaenyl-1 -Hydroxy-2 -Propylamide, N-((R)-1-hydroxypropan-2-yl)icosa-5Z,8Z,11Z,14Z,17Z-pentaenamide
檸檬酸氫二銨（500GM）Ammonium Citrate， Dibasic， CAS# 3012-65-5； MW 226.19； ACS Reagent
七水硫酸亞鐵（500GM）Ferrous Sulfate， 7H2O， CAS# 7782-63-0； ≥99.5%
一水氯化錳（500GM）Manganese Sulfate， H2O， CAS# 10034-96-5； ≥98%
二水鉬酸鈉（1KG）Sodium Molybdate（VI）， Dihydrate， CAS# 10102-40-6； MW 241.95； ACS
L-蘇氨酸（25GM）L-Threonine， CAS# 72-19-5； MW 119.12； USP
派諾寧Y 超純級(jí)Pyronin Y UltraPure grade
低熔點(diǎn)瓊脂糖    2.5g
低熔點(diǎn)瓊脂糖    5g
低載量 PCR 片段純化試劑盒    100 次
低載量 PCR 片段純化試劑盒    50 次
地高標(biāo)記 dUTP 溶液    25μL
地塞米松    100mg
地塞米松溶液 ,50mg/mL    1mL