人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞；HK-2圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞；HK-2圖片
形態(tài)特性  上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞，通過導(dǎo)入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉(zhuǎn)染外生包裝細胞Psi-2，Psi-2細胞產(chǎn)生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317，zui后將PA317產(chǎn)生的病毒顆粒導(dǎo)入正常的腎皮質(zhì)近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418篩選轉(zhuǎn)導(dǎo)克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Hoechst33342 干粉    10mg
HRP 標記的抗地高抗體    10μL
HRP 標記的抗生物素抗體    10μL
HRP 標記的兔抗 GST 標簽多抗    20μL
HRP 標記內(nèi)參抗體 (GAPDH)    20μL
HRP 標記內(nèi)參抗體 (β-actin)    20μL
HRP 標記內(nèi)參抗體 (β-Tubulin)    20μL
HRP 穩(wěn)定劑 / 稀釋劑    200mL
HT 篩選培養(yǎng)基    500mL
Hydroxystilbamidine     10mg
還原劑兼容型 BCA 蛋白定量試劑盒    250 次
海量 PCR 片段純化試劑盒    5次
海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒    100 次
海藻糖溶液，1.5M，PCR     1.5mL
核苷酸類似物法易錯 PCR 試劑盒    15 次
核黃素    25g
核酸內(nèi)切酶 III (Nth)    1000U
核酸內(nèi)切酶 IV    1000U1-Oxyl-2,2,5,5-tetramethylpyrroline-3-carboxylate NHS ester （25 mg）1-Oxyl-2,2,5,5-tetramethylpyrroline-3-carboxylate N-hydroxysuccinimide ester|NSC 319633|OXYL-1-NHS|Tempyo Ester； 3-
WHI-P154 （25 mg）JAK3 Inhibitor II|Janus-Associated Kinase 3 Inhibitor II； 2-bromo-4-[（6,7-dimethoxy-4-quinazolinyl）amino]-phenol
AWD 131-138 （5 mg）Imepitoin； 1-（4-chlorophenyl）-1,5-dihydro-4-（4-morpholinyl）-2H-imidazol-2-one
PD 0332991 （10 mg）Palbociclib； 6-
β-Nicotyrine （25 mg）NSC 127943|NSC 407276|α-Nicotyrine； 3-（1-methyl-1H-pyrrol-2-yl）-pyridine
AB-CHMINACA metabolite M4 （10 mg）1-（cyclohexylmethyl）-1H-indazole-3-carboxylic acid
GSK-LSD1 （hydrochloride） （5 mg）N-[（1R,2S）-2-phenylcyclopropyl]-4-piperidinamine, dihydrochloride
X-Gal5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-Galactopyranoside； 5-bromo-4-chloro-1H-indol-3-yl-β-D-galactopyranoside
BVT 948 （1 mg）4-hydroxy-3,3-dimethyl-2H-benz[g]indole-2,5（3H）-dione
Avagacestat （5 mg）BMS 708163； （2R）-2-[[（4-chlorophenyl）sulfonyl][[2-fluoro-4-（1,2,4-oxadiazol-3-yl）phenyl]methyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pent*
Tesaglitazar （1 mg）AZ 242|GalidaTM； （αS）-ethoxy-4-[2-[4-[（methylsulfonyl）oxy]phenyl]ethoxy]-benzenepropanoic acid
Clinafloxacin （hydrochloride） （100 mg）AM1091； 7-（3-ami-pyrrolidinyl）-8-chloro-1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid
MCC-555 （25 mg）Isaglitazone|Netoglitazone|RWJ 241947； 5-[[6-[（2-fluorophenyl）methoxy]-2-naphthalenyl]methyl]-2,4-thiazolidinedione
Deltarasin （hydrochloride） （1 mg）
核酸內(nèi)切酶 V    250U
核酸內(nèi)切酶 VIII    1000U
核酸清除劑    1.5mL