人類成纖維細(xì)胞系；CNLMG-B5538SKIN圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人類成纖維細(xì)胞系；CNLMG-B5538SKIN圖片
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開(kāi)。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C8
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

藍(lán)膠瓊脂糖    50mL
藍(lán)色葡聚糖 2000    1g
酪氨酸脫羧酶    25U
酪蛋白    50g
酪蛋白    50g
酪蛋白溶液 (PBS)    100mL
酪蛋白溶液 (TBS)    100mL
冷凍型血液 RNA 保存液    100mL
冷啟動(dòng)核酸酶    10,000U
離析酶 R-10    1g
麗春紅 S    10g
麗春紅 S 染膜液    250mL
利福平    250mg
利福平溶液 ,100mg/mL    10mL
鏈激酶    100μg
鏈霉蛋白酶 E    250mg
鏈霉菌 PCR Mix 6    100 次
鏈霉親和素    1mgBAY-85-3934 （10 mg）Molidustat； 1,2-dihydro-2-[6-（4-morpholinyl）-4-pyrimidinyl]-4-（1H-1,2,3-triazol-1-yl）-3H-pyrazol-3-one
YZ9 （50 mg）7-hydroxycoumarin-3-Carboxylic Acid ethyl ester； 7-hydroxy-2-ozo-2H-1-benzopyran-3-carboxylic acid, ethyl ester
ML-60218 （10 mg）2-chloro-N-[3-（5-chloro-3-methylbenzo[b]thien-2-yl）-1-methyl-1H-pyrazol-5-yl]-benzenesulfonamide
Apixaban （50 mg）BMS 562247-01|Eliquis； 4,5,6,7-tetrahydro-1-（4-methoxyphenyl）-7-oxo-6-[4-（2-oxo-1-piperidinyl）phenyl]-1H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-3-carboxamide
Zidovudine （1 g）AZT|Azidothymidine|NSC 602670|Retrovir|ZDV； 3’-
Diclazepam （10 mg）2’-Chlorodiazepam|Ro 5-3448； 7-chloro-5-（2-chlorophenyl）-1,3-dihydro-1-methyl-2H-1,4-benzodiazepin-2-one
Conoidin A （250 mg）2,3-bis（bromomethyl）-quinoxaline 1,4-dioxide
Mescaline （hydrochloride） （exempt preparation） （1 mg）NSC 30419|TMPEA； 3,4,5-trimethoxy-benzeneethanamine, monohydrochloride
Ivabradine （hydrochloride） （250 mg）S 16257； 3-[3-[[[（7S）-3,4-dimethoxybicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-yl]methyl]methylamino]propyl]-1,3,4,5-tetrahydro-7,8-dimethoxy-2H-3-benzazepin-2-one, monohydrochloride
Edrophonium （chloride） （100 mg）Enlon|Tensilon； N-ethyl-3-hydroxy-N,N-dimethyl-benzenaminium, monochloride
MF498 （10 mg）N-[[[4-（5,9-diethoxy-6,8-dihydro-6-oxo-7H-pyrrolo[3,4-g]quinolin-7-yl）-3-methylphenyl]methyl]sulfonyl]-2-methoxy-benzeneacetamide
Zalcitabine （250 mg）2’,3’-Dideoxycytidine|Hivid|NSC 606170|Ro 24-2027/000|ddC； 2’,3’-dideoxy-cytidine
Cefpodoxime （free acid） （10 mg）R 3763； （6R）-7R-[[（2Z）-2-（2-amino-4-thiazolyl）-2-（methoxyimino）acetyl]amino]-3-（methoxymethyl）-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid
N-Acetyl-4-benzoquinone imine （1 mg）N-Acetyl-p-benzoquinonimine|NAPQI； N-（4-oxo-2,5-cyclohexadien-1-ylidene）-acetamide
鏈霉親和素，AP 標(biāo)記    0.5mL
鏈霉親和素，HRP 標(biāo)記    0.1mL
鏈霉親和素磁珠    2mL
鏈脲佐菌素    100mg
鏈脲佐菌素溶液 ,10mg/mL    10mL
鏈親和素    0.1mg