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供貨周期	現(xiàn)貨	貨號	GOY-F10183
應(yīng)用領(lǐng)域	化工	主要用途	僅供科研使用

DNA提取流程圖：

下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研

中文名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	貨號
細(xì)胞質(zhì)標(biāo)記染料,長效示蹤CDCFDA,SE	5-(and-6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein diacetate, succinimidyl ester	10mg	GOY-F10183

產(chǎn)品詳細(xì)介紹：

活細(xì)胞熒光示蹤探針CDCFDA, SE已被廣泛證實(shí)，用CDCFDA 活細(xì)胞綠色熒光探針標(biāo)記細(xì)胞能有效確定總細(xì)胞的數(shù)量和一個樣本中存在多少活細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合熒光染色法是分析非均質(zhì)細(xì)胞種群的有力工具。

FDA 和它的衍生物無熒光分子進(jìn)入細(xì)胞后被胞內(nèi)無特異性的酯酶所水解產(chǎn)生熒光。這些熒光產(chǎn)物只能積聚在具有完整細(xì)胞膜的細(xì)胞中。因此，死細(xì)胞無完整細(xì)胞膜不能被染色。FDA 具備精確地膜轉(zhuǎn)運(yùn)動力學(xué)和胞內(nèi)水解作用或者類似物（CDCFDA）相關(guān)的細(xì)胞功能，因此可以通過熒光顯微鏡或者流式細(xì)胞儀來檢測FDA 標(biāo)記的細(xì)胞。過FDA 熒光標(biāo)記的細(xì)胞在細(xì)胞系或者菌株中存在變化，可能是由于不同胞內(nèi)酯酶的活性所造成的。活細(xì)胞熒光示蹤探針CDCFDA, 琥珀酰亞胺酯是一個胺化FDA 衍生物，可以用來制備各種FDA偶聯(lián)物。

操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
兔白細(xì)胞介素35elisa試劑盒兔白細(xì)胞介素35試劑盒規(guī)格型號：96T/48T 兔白細(xì)胞介素35試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔白細(xì)胞介素35試劑盒、兔白細(xì)胞介素35 elisa試劑盒保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 4-Biphenylcarboxylic acid 中文名：4-苯甲酸分子式：C13H10O2 度：98.0%

兔白細(xì)胞介素-35（IL-35）ELISA試劑盒 4β-Hydroxywithanolide E 中文名：4β-羥基醉茄內(nèi)酯E 分子式：C28H38O8 度：98.0%

兔白細(xì)胞介素-35（IL-35）ELISA試劑盒 4β-Hydroxywithanolide E 中文名：4β-羥基醉茄內(nèi)酯E 分子式：C28H38O8

兔白細(xì)胞介素1elisa試劑盒兔白細(xì)胞介素1試劑盒規(guī)格型號：96T/48T 兔白細(xì)胞介素1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔白細(xì)胞介素1試劑盒、兔白細(xì)胞介素1elisa試劑盒保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 4-Biphenylcarboxylic acid 中文名：4-苯甲酸分子式：C13H10O2

兔白細(xì)胞介素15elisa試劑盒兔白細(xì)胞介素15試劑盒規(guī)格型號：96T/48T 兔白細(xì)胞介素15試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔白細(xì)胞介素15試劑盒、兔白細(xì)胞介素15elisa試劑盒保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 4-Biphenylcarboxylic acid 92-92-2 中文名：4-苯甲酸分子式：C13H10O2 度：98.0%
D-核糖(標(biāo)準(zhǔn)品) D-(-)-Ribose 質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品大鼠乙酰(Ach)ELISA檢測試劑盒Ratacetylcholine,ACHELISAKit 96T/48T

D-核糖 D-(-)-Ribose 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人蛋白C(PC)試劑盒 Human Protein C ELISA Kit

二硫蘇糖(DTT) DL-Dithiothreitol 質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級 RatPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit大鼠0酸肌3激酶(PI3K)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

D(+)-松二糖 D(+)-Turanose 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR GSK-3ALPHA蛋白共沉淀分析試劑盒5

D-果糖-1,6-二三鈉鹽 D-Fructose 1,6-bisphosphate salt 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR Mousethioredoxieductase,xRELISA試劑盒小鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

海帶多糖；昆布糖 (來自褐藻類) Laminarin from Laminaria digitata 質(zhì)量規(guī)格：BR，日本進(jìn)口分裝小鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒，英文名： PA-IgG/M/A ELISA Kit

(1:250)，粉 Pancreatin 質(zhì)量規(guī)格：酶活1:250,BR 大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA檢測試劑盒RatThromboxaneB2,TXB2ELISAKit 96T/48T

木瓜蛋白酶(800u/mg) Papain 質(zhì)量規(guī)格：800u/mg 人蛋白ATP1B4(ATP1B4)試劑盒 Human ATP1B4 ELISA Kit

木瓜蛋白酶(2000u/mg) Papain 質(zhì)量規(guī)格：2000u/mg;200萬u/g Ratpigmeepithelium-derivedfactor,PEDFELISAKit大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(1:2500) Pancreatin 質(zhì)量規(guī)格：酶活1:2500,BR GSK-3BETA蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25
細(xì)胞質(zhì)標(biāo)記染料,長效示蹤CDCFDA,SE細(xì)胞Akt/PKB激酶總活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

組織Akt3/PKBγ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

細(xì)胞Akt3/PKBγ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

組織Akt2/PKBβ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

細(xì)胞Akt2/PKBβ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))