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當(dāng)前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>程序降溫盒提高細胞凍存的存活率的方法
1.細胞系實驗室凍存盒平時放4度,需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮,貴重的細胞盡快轉(zhuǎn)移,不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?,F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的,很方便,效果也不錯的。
2.異丙醇的量是要保證的,不能低于表明的線,否則不能起到很好的程序性降溫作用,我們是在4度放置,放了細胞后立馬放到-80度冰箱,第二天再轉(zhuǎn)移到液氮,效果很不錯。異丙醇熔點:-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性:口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數(shù)據(jù):眼睛- 兔子100 毫克/ !請注意清理!
3.細胞系應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的,因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右,所以從-80℃拿出來的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次,而且保證液體量達到刻度線,否則降溫效果會受到影響。
4.凍存盒里的異丙醇一般是250ml,低于刻度了要加上,理論上是5次以后更換異丙醇,但是異丙醇對環(huán)境有害,我們可以多用幾次,只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對細胞有毒性,尤其是室溫的時候,所以凍存盒和凍存液先放4°,等把細胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里,還放回4°,細胞系等到出細胞間的時候再拿到-80°里面保存。
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