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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>原代細(xì)胞核的分離提取
(一)原代細(xì)胞操作步驟
1.用頸椎脫位的方法處死小白鼠后,迅速剖開腹部取出肝臟,剪成小塊(去除結(jié)締組織)盡快置于盛有0.9%NaCl的燒杯中,反復(fù)洗滌,盡量除去血污,用濾紙吸去表面的液體。
2.將濕重約1g的肝組織放在小平皿中,用量筒量取8ml預(yù)冷的0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液,先加少量該溶液于平皿中,盡量剪碎肝組織后,再全部加入。
3.剪碎的肝組織倒入勻漿管中,使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中,左手持之,右手將勻漿搗桿垂直插入管中,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨3~5次,用3層紗布過濾勻漿液于離心管中,然后制備一張涂片①,做好標(biāo)記,自然干燥。
4.原代細(xì)胞將裝有濾液的離心管配平后,放入普通離心機(jī),以2500rpm,離心15分鐘;(1)緩緩取上清液,移入高速離心管中,保存于有冰塊的燒杯中,待分離線粒體用;(2)同時(shí)涂一張上清液片②做好標(biāo)記,自然干燥;(3)余下的沉淀物進(jìn)行下一步驟。
5.用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液懸浮沉淀物,以2500rpm離心15分鐘棄上清,將殘留液體用吸管吹打成懸液,滴一滴于干凈的載玻片上,涂片③,自然干燥。
6.將①、②、③涂片用l%甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。
(二)原代細(xì)胞結(jié)果 分別于高倍鏡下觀察三張涂片,描述鏡下所見。
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