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            天然蛋白、重組蛋白

            原代細胞如何消除組織培養(yǎng)的污染

            時間:2017/5/18閱讀:1874
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            原代細胞當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。
            高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。
            ①在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞,稀釋到常規(guī)原代細胞傳代的濃度。
            ②分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
            ③每天觀測細胞毒性指標(biāo),如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。
            ④確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2-3代。
            ⑤在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。
            ⑥重復(fù)步驟4。
            ⑦在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,原代細胞確定污染是否以已被消除。

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