狠狠色丁香久久综合婷婷亚洲成人福利在线-欧美日韩在线观看免费-国产99久久久久久免费看-国产欧美在线一区二区三区-欧美精品一区二区三区免费观看-国内精品99亚洲免费高清

            上海研生實業(yè)有限公司
            中級會員 | 第10年

            15201736385

            人類外周血淋巴細胞的培養(yǎng)方法

            時間:2017/6/15閱讀:3871
            分享:

            實驗原理 
            染色體是在顯微鏡下可見細胞系有絲分裂過程中出現(xiàn)的結構。因此,必須獲得染色體標本才能進行檢查分析,通常情況下,都是利用外周血淋巴細胞進行核型分析。正常情況下,人體外周血淋巴細胞不再分裂,但植物血凝素(PHA)可刺激血中的淋巴細胞轉化成淋巴母細胞,使其恢復增殖能力。因此,可采取少量外周靜脈血,做短期培養(yǎng),培養(yǎng)至72小時細胞進入增殖旺盛期,此時加入秋水仙素抑制細胞分裂,使細胞分裂停止在中期以獲得足夠量的分裂期細胞,經(jīng)低滲、固定、制片、染色后鏡下觀察進行核型分析。上述制備的染色體標本經(jīng)胰蛋白酶消化、Giemsa染色后,可在染色體縱軸上顯示出著色深、淺相間的橫紋——帶,表明每條染色體的特征。 

            實驗用品 
            1.采血器材、酒精燈、培養(yǎng)瓶、超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、離心機、刻度離心管、乳頭吸管、試管架、量筒、試劑瓶、載玻片、吹風機、托盤天平、顯微鏡、鏡油、二甲苯、擦鏡紙、鑷子、燒杯、記號筆、玻片架、火柴、10ml注射器。 
            2.RPMI 1640液體培養(yǎng)基、小牛血清、肝素(500 U/ml)、植物血凝素(PHA)、秋水仙素(10mg/ml)、KCl低滲液(0.075mol/L)、甲醇、冰乙酸、Giemsa原液、磷酸緩沖液(PH6.8)。 
            3.2.5%胰酶溶液(hanks液配制)、0.4%酚紅、Giemsa染色液、1N鹽酸、1N氫氧化鈉。 

            實驗步驟 
            一.外周血淋巴細胞系染色體標本制備與分析 
            1. 采血及接種培養(yǎng) 
            1.1 在酒精燈火焰上,用滅菌注射器(一次性注射器)抽取肝素0.2ml,使肝素濕潤至管壁。 
            1.2 常規(guī)消毒后,采集外周靜脈血5ml,轉動注射器使血液與肝素混勻。 
            1.3 在超凈工作臺中,預先將RPMI 1640液體培養(yǎng)基(5ml,含植物血凝素60mg/ml、10%小牛血清)加入消毒好的小培養(yǎng)瓶中,再滴加25滴全血(6號針頭),水平搖動混勻。 
            1.4 置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時。培養(yǎng)過程中每天水平搖動培養(yǎng)物1~2次,使血液均勻懸浮,再繼續(xù)培養(yǎng)。 
            1.5 終止培養(yǎng)前2~4小時,加入秋水仙素,使終濃度達到0.2μg/ml。輕輕搖動培養(yǎng)瓶,使秋水仙素混勻。繼續(xù)培養(yǎng)至72小時。 

            2.制片 
            2.1 收集細胞時,去掉瓶塞,用乳頭吸管吸取培養(yǎng)液,充分混勻培養(yǎng)物,再將全部培養(yǎng)物吸入刻度離心管中。 
            2.2 1000 rpm離心8分鐘(注意先配平)。 
            2.3 棄上清液,加入37℃預溫的 0.075 mol/L KCl溶液8 ml,用吸管輕輕吹打細胞團混勻后,置37℃恒溫水浴箱低滲處理25分鐘。 
            2.4 加入 1ml新配制的固定劑(甲醇:冰乙酸=3:1),用吸管小心吹打、混勻,1000rpm離心8分鐘。 
            2.5 棄上清液,加入8ml固定劑,吹打細胞團制成細胞懸液后,室溫下固定20分鐘。 
            2.6 1000 rpm離心 8分鐘。 
            2.7 棄上清液,重復固定一次。 
            2.8 棄上清液,根據(jù)細胞數(shù)量的多少適當加入數(shù)滴新配制的固定劑,吹打細胞制成懸液。 
            2.9 吸取少量細胞懸液,滴2~3滴于冰水浸泡過的載玻片上,吹散,氣干。 
            2.10 將標本置Giemsa染液中,染色8分鐘,水洗去浮色,氣干。 
            2.11 顯微鏡下觀察染色體標本分裂相的多少及分散細胞系情況。 

             

            會員登錄

            ×

            請輸入賬號

            請輸入密碼

            =

            請輸驗證碼

            收藏該商鋪

            X
            該信息已收藏!
            標簽:
            保存成功

            (空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

            常用:

            提示

            X
            您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
            撥打電話
            在線留言