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原代細(xì)胞保存溫度越低,保存時(shí)限更長;溫度越低,對細(xì)胞傷害越大;低溫也不怕,我有防凍劑(e.g.甘油)。下面的表格就是五種常見保存細(xì)菌細(xì)胞的方法和大約時(shí)限。
保存條件 溫度°C 大約時(shí)間
瓊脂平板 4 4-6周
(AgarPlate)
穿刺培養(yǎng)基 4 3周-1年
(stabculture)
冰凍 -20 1-3年
超低溫冰凍 -20 1-10年
凍干 ≤4 15年+
但是,具體到你用的那一種菌用什么方法保存能夠保存多長時(shí)間,就要視情況而定了,并沒有一個*答案,上表中所列出來的時(shí)限一般來說是適用大部分細(xì)菌樣本的。小編如果要保存一個細(xì)胞樣本,一般不會費(fèi)時(shí)費(fèi)力來查這個表的,那怎么辦?問師兄,找?guī)熃憧﹡
短期保存
上表中的瓊脂平板和穿刺培養(yǎng)基都適合于短期保存。這兩種方法都保存在4度冰箱,為避免雜菌,用塑料或封口膜(parafilm)對平板或培養(yǎng)瓶進(jìn)行封口,這樣可以拒絕冰箱內(nèi)本身存在的雜菌、霉菌入侵樣本,也可以防止自己的培養(yǎng)基過快失水而變得干燥。小編就曾有一盤放在4度冰箱的菌落樣本,忘記了封口,一個月后,菌落和瓊脂都變成了木乃伊T_T
長期保存
長期低溫冰凍必然會導(dǎo)致部分細(xì)胞死亡,而且很多時(shí)候我們要把原代細(xì)胞樣本拿來重新接種做實(shí)驗(yàn),所以解凍再凍的過程也會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。那么起始樣本的細(xì)胞濃度就要達(dá)到一定的高度,這樣在以后保存的過程中就算死亡一些細(xì)胞,我們也還有很多有效細(xì)胞可以用,一般來說這個起始細(xì)胞密度要達(dá)到10的七次方的樣子(單位:細(xì)胞/mL)。
除了常見抗凍劑甘油外,我們也會添加多糖(polysaccharide)或者葡聚糖(dextran)或某些蛋白質(zhì)用來吸附在細(xì)胞表面形成保護(hù)薄膜,防止在冷凍過程中對細(xì)胞的破壞。
另外在解凍細(xì)胞樣本的時(shí)候,在低溫條件下,不要讓整個細(xì)胞樣本解凍成液體,只要解凍到少量液態(tài)樣本出現(xiàn)就好。這樣也可以幫助更多的樣本存活過一次解-再凍的過程,方便下次或多次使用。
關(guān)于凍干保存,其實(shí)并不是所有的細(xì)菌都適合凍干,有的原代細(xì)胞沒法在凍干過程中存活。所以如果你實(shí)在需要超長時(shí)間保存(超過十年)你的樣本,一定要自己驗(yàn)證一次,看凍干細(xì)胞再培養(yǎng)能不能成功。
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