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            正確復(fù)蘇原代細胞的方法

            時間:2017/8/1閱讀:496
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            原代細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?請看下文:
            活力檢查 – 千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染,如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!
            形態(tài)檢查 – 檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。
            凍存細胞:
            補充新的培養(yǎng)液 – 在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。
            在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度 ~5 x106 cells/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整)
            凍存液 – 用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇zui合適的凍存液:
            – 5-10% DMSO – 注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì).
            – 5-15% 甘油
            – 如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。
            在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml.
            程序降溫是保證凍存細胞活性的關(guān)鍵,使用 Mr. Frosty保證降溫速度為1°-3°C,置于-80°C冰箱內(nèi)過夜,如果沒有Mr. Frosty裝置,可以使用實驗室常見的泡沫盒、棉花等。.
            放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以zui快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!
            還有一個zui重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!
            細胞復(fù)蘇-正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:
            當從液氮罐內(nèi)取出原代細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要從液氮內(nèi)轉(zhuǎn)移凍存管至熱的容器內(nèi),應(yīng)在液氮內(nèi)完成
            應(yīng)該與37℃水浴中快速溶解凍存的細胞,并保證凍存管蓋子在水面之上以避免污染。當zui小的冰塊溶解后,用70%酒精擦拭凍存管,并迅速轉(zhuǎn)移至新的已經(jīng)預(yù)熱的培養(yǎng)基內(nèi)。
            觀察細胞生長形態(tài)和生長比率。
            其實,細胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。
            BRCA1  乳腺癌易感基因1抗原    進口/國產(chǎn)    規(guī)格:     0.5mg
            PSD-95   突觸后密度蛋白95(抗原)    現(xiàn)貨供應(yīng)    規(guī)格:     0.5mg
            BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2)  乳腺癌易感基因2抗原    *    規(guī)格:     0.5mg
            PTP-1B (Protein-tyrosine phosphatase, non-receptor )  蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(抗原)    進口/國產(chǎn)    規(guī)格:     0.5mg
            RAR-Alpha (Retinoic acid -R-Alpha)  維甲酸受體-α 多肽    現(xiàn)貨供應(yīng)    規(guī)格:     0.5mg
            glycoprotein (E1 glycoprotein) [Rubella virus]  風疹病毒糖蛋白多肽片段    *    規(guī)格:     0.5mg
            原代細胞

             

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