狠狠色丁香久久综合婷婷亚洲成人福利在线-欧美日韩在线观看免费-国产99久久久久久免费看-国产欧美在线一区二区三区-欧美精品一区二区三区免费观看-国内精品99亚洲免费高清

            上海研生實(shí)業(yè)有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第10年

            15201736385

            細(xì)胞
            elisa酶聯(lián)免疫試劑盒
            生化試劑
            PCR試劑盒
            標(biāo)準(zhǔn)品
            PCR檢測(cè)試劑盒
            質(zhì)粒
            定量PCR試劑盒
            生化檢測(cè)試劑盒
            科研細(xì)胞
            天然蛋白、重組蛋白

            如何使細(xì)胞培養(yǎng)物快速適應(yīng)無血清培養(yǎng)基?

            時(shí)間:2017/7/27閱讀:626
            分享:

            許多原代細(xì)胞系容易適應(yīng)無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基,而對(duì)環(huán)境要求過高的其它細(xì)胞卻難以適應(yīng)變化,這就需要更為專業(yè)的方法來適應(yīng)變化。而根據(jù)細(xì)胞系的特性,有兩種方法可使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。*種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法;另一種方法是直接適應(yīng)。
            一、連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法
            *種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法。通過一系列的血清還原步驟,使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。這是優(yōu)先選用的方法,且不對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境形成太過惡劣的變化。
            連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法——方法1
            使原培養(yǎng)基內(nèi)的細(xì)胞連續(xù)地經(jīng)過以下幾個(gè)階段:
            階段1:75%補(bǔ)加血清的培養(yǎng)基或25%無血清培養(yǎng)基
            階段2:50%補(bǔ)加血清的培養(yǎng)基或50%無血清培養(yǎng)基
            階段3:25%補(bǔ)加血清的培養(yǎng)基或75%無血清培養(yǎng)基
            階段4:100%無血清培養(yǎng)基

            連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法——方法2
            1、以原培養(yǎng)基中的相同濃度,將血清加入無血清培養(yǎng)基內(nèi)。將細(xì)胞從含血清的原培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到加了血清的無血清培養(yǎng)基,此時(shí)應(yīng)注意要提培養(yǎng)系統(tǒng)中的細(xì)胞密度。讓細(xì)胞有一個(gè)適應(yīng)過渡期。
            2、按照方法1,緩慢地降低血清濃度,使細(xì)胞在每個(gè)階段有適應(yīng)的時(shí)間。
            3、一旦血清補(bǔ)加量降為0,在用于進(jìn)行分析或其他操作前,讓細(xì)胞培養(yǎng)物具有數(shù)個(gè)適應(yīng)過渡期。
            二、直接適應(yīng)法
            另一種方法是直接適應(yīng)。其中,原代細(xì)胞直接從含血清培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到無血清培養(yǎng)基內(nèi)。將大量細(xì)胞直接轉(zhuǎn)移到無血清或無蛋白的新培養(yǎng)基內(nèi)。細(xì)胞必須處于指數(shù)生長(zhǎng)期中期,且存活率>90%。
            每3到4天更換約50%的培養(yǎng)基,以防止培養(yǎng)基變成酸性。維持高于正常值的細(xì)胞培養(yǎng)密度,直至培養(yǎng)的細(xì)胞需要每日更換培養(yǎng)基。這時(shí),將細(xì)胞擴(kuò)增到多個(gè)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
            考慮建議
            請(qǐng)?jiān)谶m應(yīng)過程中,細(xì)胞通常對(duì)PH和溫度變化較為敏感。讓細(xì)胞在每個(gè)階段都至少有一個(gè)適應(yīng)過渡期。
            細(xì)胞存活率和細(xì)胞密度
            細(xì)胞在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中期快速分裂,且在適應(yīng)過程開始時(shí),存活率大于90%。這一點(diǎn)至關(guān)重要。當(dāng)細(xì)胞需傳代時(shí),建議采用1:2或1:3的小傳代比例,以維持更高的細(xì)胞密度,同時(shí)提供隔絕期間可能有助于細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)因子。當(dāng)細(xì)胞適應(yīng)新的培養(yǎng)條件時(shí),在增大細(xì)胞傳代密度。
            細(xì)胞生長(zhǎng)
            如果在適應(yīng)過程中,細(xì)胞停止了生長(zhǎng),則需讓細(xì)胞有更多的時(shí)間來適應(yīng)培養(yǎng)基組合。例如,在方法1的階段4,向無血清培養(yǎng)基添加少量的血清(1-3%)。這樣有助于細(xì)胞更容易地適應(yīng)新的培養(yǎng)基。然后,在幾個(gè)過渡期內(nèi),緩慢地減少血清量,直至學(xué)清量為0。
            懸浮培養(yǎng)物
            Meiatech公司的無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基不含血清中所發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞附著延伸影子。在一段過渡期內(nèi),貼壁細(xì)胞將開始離開表面,并成為懸浮細(xì)胞系開始生長(zhǎng)。細(xì)胞也可能因適應(yīng)而發(fā)生形態(tài)變化。監(jiān)測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度,只要細(xì)胞能夠與新系統(tǒng)相融合,任何形態(tài)變化都不重要。
            細(xì)胞叢
            在適應(yīng)于無血清培養(yǎng)期間,細(xì)胞容易形成叢。傳代培養(yǎng)時(shí),將叢輕輕折斷,使其分散開。將培養(yǎng)物從靜止細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)移到可旋轉(zhuǎn)錐形瓶?jī)?nèi),這樣可能會(huì)有助于防止細(xì)胞叢的形成。
            抗生素
            由于血清蛋白易于粘合到抗生素上,因此,不建議在無血清適應(yīng)過程中使用抗生素。如不存在血清蛋白,則抗生素水平可能會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性。
            預(yù)防措施
            確保在開始適應(yīng)過程前,儲(chǔ)存有大量原培養(yǎng)基的細(xì)胞。如果原代細(xì)胞沒有存活到下一階段,則在整個(gè)過程中保存每一階段使用的培養(yǎng)瓶。

            會(huì)員登錄

            ×

            請(qǐng)輸入賬號(hào)

            請(qǐng)輸入密碼

            =

            請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

            收藏該商鋪

            X
            該信息已收藏!
            標(biāo)簽:
            保存成功

            (空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

            常用:

            提示

            X
            您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
            撥打電話
            在線留言