產(chǎn)品名稱：丙酮酸磷酸雙激酶（PPDK)測(cè)試盒品牌

規(guī)格 : 50管/48樣、100管/96樣

測(cè)試方法:微量法、紫外分光光度法

貨號(hào)：YS-01S6685

測(cè)定意義

丙酮酸磷酸雙激酶（pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1）是C4途徑和景天科酸代謝途徑的限速酶，催化ATP、丙酮酸和Pi經(jīng)三步反應(yīng)生成磷酸烯醇式丙酮酸。該酶主要存在于C4植物的葉綠體基質(zhì)中，對(duì)光合功能具有重要調(diào)節(jié)作用。

測(cè)定原理：

PPDK的逆向反應(yīng)催化磷酸烯醇式丙酮酸、AMP和PPi生成丙酮酸、ATP和Pi，乳酸脫氫酶進(jìn)一步催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+，在340nm測(cè)定NADH減少速率，計(jì)算PPDK活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失，請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買(mǎi)說(shuō)明！

樣品制備：

1）. 直接或稀釋使用清亮無(wú)色中性液體樣品，體積可達(dá)2.000ml。

2）. 過(guò)濾混濁溶液。

3）. 除去樣品中的CO 2 。

4 ）. 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）. 用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

特點(diǎn):

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見(jiàn)區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測(cè)定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對(duì)元素測(cè)定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來(lái)的幾萬(wàn)提高到幾十萬(wàn)。相對(duì)于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測(cè)定,已有比較滿意的方法了。

(4)準(zhǔn)確度高

對(duì)于一般的分光光度法來(lái)說(shuō),其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測(cè)量,則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。

(6)分析成本低、操作簡(jiǎn)便、快速

Anti-Insulin/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記胰島素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rabbit IgG 兔IgG(親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 10mg

高遷移率族蛋白A1抗體 Anti-HMGA1 0.2ml

Mouse Anti-Goat IgG 小鼠抗羊IgG 1mg

FIS1 英文名稱： 線粒體裂變1蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Ret (Tyr905) 磷酸化指狀蛋白R(shí)ET抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit IgG 兔IgG(親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 10mg

IKB Beta (Inhibitor of KB) KB抑制蛋白β(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Acetyl CoA Carboxylase 乙酰A羧化酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-CDKN2A/P16 (Ser140) 磷酸化抑癌基因p16抗體 規(guī)格 0.1ml

人血清IgM液體(70-80%) 10mg 國(guó)產(chǎn)

Wnt receptor 英文名稱： Wnt信號(hào)受體蛋白抗體 0.1ml

phospho-DDX58 (Thr170) 英文名稱： 磷酸化DDX58抗體 0.1ml

Anti-Acetyl CoA Carboxylase 乙酰A羧化酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

STAT3 英文名稱： 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體 0.1ml

EDIL3 英文名稱： 表皮生長(zhǎng)因子樣重復(fù)折疊1結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 0.2ml

嗜中性粒細(xì)胞抗原CD177抗體 Anti-CD177/NB1 0.1ml

Anti-VDAC/FITC 熒光素標(biāo)記電壓依賴性陰離子通道抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-GSK-3 Beta(Ser21+Ser29) 磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗體 規(guī)格 0.1ml

CD46/MCP(membrane cofactor protein)rat, mouse 膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
丙酮酸磷酸雙激酶（PPDK)測(cè)試盒品牌二十二烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))奧拉西坦組織IKKα酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

二溴(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%)鹽酸貝凡洛爾IKKβ酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

1,2-標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 mg/l溶于甲)鹽酸布因組織IKKβ酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

正癸烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8%(GC))丁苯酞IRAK1酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

1,1-二氯乙烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析,≥99.7%(GC))2-氨基-4-氯苯酚組織IRAK1酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

2,4-二硝苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)海雜質(zhì)IIRAK4酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

2,4-二硝苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/ml,基體：甲)海雜質(zhì)Ⅲ組織IRAK4酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

2,4-二硝苯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析)左卡尼汀JNK1酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）