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            上海研生實(shí)業(yè)有限公司
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            展開青霉探針法熒光定量PCR試劑盒

            參  考  價(jià)面議
            具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

            產(chǎn)品型號50T

            品       牌其他品牌

            廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

            所  在  地上海市

            更新時(shí)間:2020-09-30 09:42:03瀏覽次數(shù):297次

            聯(lián)系我時(shí),請告知來自 化工儀器網(wǎng)
            CAS 詳見說明書 純度 詳見說明書
            分子量 詳見說明書 分子式 詳見說明書
            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
            貨號 YSP7064 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
            主要用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
            展開青霉探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。

            【產(chǎn)品名稱】展開青霉探針法熒光定量PCR試劑盒
            【英文名稱】Penicillium patulum
            【產(chǎn)品編號】YSP7064
            【包裝規(guī)格】50T
            【預(yù)期用途】
            產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測,所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀,可通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
            【檢驗(yàn)原理】
            本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),針對鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針,通過實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR(Taqman探針法)對鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測。
            *的擴(kuò)增性能:
            高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板,擴(kuò)增β-actin基因,與同類產(chǎn)品相比,UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號更強(qiáng),擴(kuò)增效率更高。
            ?
            PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
            展開青霉探針法熒光定量PCR試劑盒方法
            1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
            10×PCR buffer                   

            5 μl     dNTP mix (2mM)             
            4 μl     引物1(10pM)                 
            2 μl     引物2(10pM)                 
            2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
            1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
            1 μl      加ddH2O至 50 μl  
            視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
            2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
            3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
            4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
            PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

            循環(huán)步驟

            溫度

            時(shí)間

            循環(huán)數(shù)

            預(yù)變性

            94℃

            5   min

            1

            變性

            94℃

            10   sec

            30-40

            退火

            50-65℃

            20   sec

            30-40

            延伸

            72℃

            30   sec/kb

            30-40

            終延伸

            72℃

            5   min

            1

            實(shí)驗(yàn)步驟:
            典型的PCR由
            (1)高溫變性模板;
            (2)引物與模板退火;
            (3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是:
            將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
            人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
            耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
            Asiaticoside型肝炎病毒核心抗體IgG檢測試劑盒10mg

            二茂鐵 質(zhì)量規(guī)格:>98% Ferrocene C2C12(小鼠成肌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

            Ligustrazine Hydrochloride阿散標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:規(guī)格:人精氨基琥珀合成酶(Argininosuccinate synthase)ELISA試劑盒 0.2ml

            人纖維連接蛋白(FN)SPP24/SPP2  分泌性蛋白24抗體規(guī)格:96T/48TAscorbyl Palmitate (AS)規(guī)格:150mgP物質(zhì)受體檢測試盒5mg人胚肺成纖維細(xì)胞,HELF細(xì)胞1x10^6cells

            D(+)Xylose型肝炎病毒核心抗體IgM檢測試劑盒20mg

            柳穿魚葉苷  英文名稱:Linaria vulgaris leaf glycoside   保存:-20℃   規(guī)格:20mg 果糖-2,6-二酶心肌酶抗體

            Isorhamnetin阿立唑相關(guān)物質(zhì)H標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:規(guī)格:人軸抑制蛋白1(Axin-1)ELISA試劑盒 0.2ml

            CMR(Human costimulatory molecules recptor) ELISA Kit  人協(xié)同刺激分子受體CAS號:102761 羥啶檢測試盒100mgHuman/人Elisa試盒37022

            7氨基4三基香豆素;香豆素1515mg

            環(huán)草隆(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 Siduron

            ART(Artemin)(抗原)  進(jìn)口、原裝免疫球蛋白G3檢測試盒500gHuman/人Elisa試盒49625947

            7氨基4基香豆素;香豆素1205mg

             TPY液體培養(yǎng)基 規(guī)格: 250g 用途: 培養(yǎng)雙歧桿菌用于果糖-6-鹽酶(F6PPK)測定

            AATK peptide  細(xì)胞凋亡關(guān)聯(lián)酪氨激酶抗原現(xiàn)貨供應(yīng)組織子檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒496468

            7氨基4基香豆素;香豆素1205mg

            西瑪津標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5%) 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=5% Simazine solution

            胃蛋白胨BR甘氨檢測試盒20mg骨成型蛋白7檢測試盒Boneglaprotein;Osteocalcin
            展開青霉探針法熒光定量PCR試劑盒補(bǔ)骨脂二黃 CAS號: 19879324 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

            補(bǔ)骨脂定 CAS號: 18642234 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

            表兒茶素 CAS號: 490460 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

            表白樺脂 CAS號: 38736775 規(guī)格: HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

            L氨 CAS號: 63912 規(guī)格: HPLC≥98%;200mg 訂購|咨詢

            D半乳糖 CAS號: 59234 規(guī)格: HPLC≥98%;100mg 訂購|咨詢

            β氨 CAS號: 107959 規(guī)格: HPLC≥98%;100mg 訂購|咨詢

            L氨 CAS號: 56417 規(guī)格: HPLC≥98%;200mg 訂購|咨詢

            γ氨 CAS號: CAS:56122 規(guī)格: HPLC≥99%;100mg 訂購|咨詢

            1,8桉葉素 CAS號: 470826 規(guī)格: HPLC≥99%;0.5mL 訂購|咨詢

            1,8二羥蒽醌 CAS號: 117102 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

            羅漢果皂苷ⅡA2 CAS號: 88901455 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

            羅漢果皂苷ⅢA1 CAS號: 88901422 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

            靈芝A CAS號: 81907622 規(guī)格: HPLC≥95%;20mg 訂購|咨詢

            異羅漢果皂苷 V CAS號: 1126032652 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
            熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟:
            (1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
            (2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
            產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
            其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為:待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
            其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

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