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            上海研生實業(yè)有限公司
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            滑液支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

            參  考  價面議
            具體成交價以合同協(xié)議為準

            產品型號50T

            品       牌其他品牌

            廠商性質經銷商

            所  在  地上海市

            更新時間:2020-09-29 11:12:16瀏覽次數:595次

            聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網
            CAS 詳見說明書 純度 詳見說明書
            分子量 詳見說明書 分子式 詳見說明書
            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
            貨號 YSP6992 應用領域 化工
            主要用途 公司產品僅用于科研
            滑液支原體探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

            產品及特點:
            1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
            2. 根據鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
            3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
            4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
            5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
            本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
            參數規(guī)格:
            產品名稱:滑液支原體探針法熒光定量PCR試劑盒
            英文名稱:Mycoplasma synoviae
            產品規(guī)格:50T
            產品運輸:低溫運輸
            產品保存:-20℃保存
            產品有效期:一年
            產品特點:本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
            運輸及保存
            低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
            自備試劑
            DNA模板、10×ROX(根據機型決定,具體見使用方法)。
            使用方法:
            一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
            1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
            2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
            3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
            4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
            5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
            6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
            7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
            二、樣品DNA的制備
            8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
            9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
            三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
            10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。
            11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。
            ?
            實驗過程:
            一、滑液支原體探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
            1. DNA模板
            2.產品僅用于科研對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
            3.10×PCR Buffer
            4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
            5.Taq酶
            二、操作步驟
            1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
                  10×PCR buffer             5μl
                  dNTP mixl                 4μl
                  引物1(10pM)               2μl
                  引物2(10PM)              2μl
                  Taq酶(2U/μl)            1μl
                  DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
                 加ddH2O至               50 μl
                 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
            2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
            3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
            4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
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            Sodium Aescinate4-氨基苯標準品規(guī)格:規(guī)格:人白細胞活化黏附因子(ALCAM)Polyclonal Antibody 0.2ml

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            毛蕊異黃7O葡萄糖苷;毛蕊異黃葡萄糖苷四基羅丹明6異硫(單一化合物)5mg

            二十二(standard for GC,≥99.0%(GC)) 質量規(guī)格:standard for GC,≥99.0%(GC) Docosane

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             CCDA基礎/彎桿菌培養(yǎng)基基礎/炭孢哌脫氧膽鹽瓊脂基礎/CCDA Base彎桿菌的分離培養(yǎng)250克國產/進口

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