目錄:愛必信（上海）生物科技有限公司>>分子生物學(xué)>>其它分子生物學(xué)試劑>> abs60327SP懸浮細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒
| CAS | - | 純度 | - |
|---|---|---|---|
| 分子量 | - | 分子式 | - |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 0.1ml;0.5ml;1.0ml;1.5ml |
| 貨號 | abs60327 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 專門用于懸浮細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的試劑 |
產(chǎn)品簡介:
該產(chǎn)品是我們研發(fā)團(tuán)隊在貼壁細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化研發(fā)成功的專門用于懸浮細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的試劑。它具有非常好的轉(zhuǎn)染性能，可高效轉(zhuǎn)染多種懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率在懸浮細(xì)胞中可高達(dá)85%以上（巨噬細(xì)胞、EGFP質(zhì)粒）。與目前市場上常見的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同，它采用生物可降解材料配制，對細(xì)胞的毒性很低，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡率不到10%。其使用也非常方便，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA混合，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細(xì)胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡便。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、較好的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)85%以上；
2、極低的細(xì)胞毒性：使用可降解生物材料，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為客觀；
3、操作簡便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液。
應(yīng)用：
適用細(xì)胞系：293F，THP-1、RAW264.7、BMDM、CHO-S、Jurkat， K562、U937，NB4、MSCs等。
操作步驟 （以24 孔板轉(zhuǎn)染為例）:
A、 細(xì)胞接種:
1、 轉(zhuǎn)染前一天或者兩天接種細(xì)胞，接種細(xì)胞量為2-4×105 個。
2、 確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞比活度為90%以上，且生長狀態(tài)良好。
3、 如果細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前一天鋪板，轉(zhuǎn)染時可以不用換液，如果細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，轉(zhuǎn)染時最好換液。
B、 SP/DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備(該步完成后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)染):
1、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul Trans buffer，再加入適量的DNA，見附表。用移液器輕輕混勻成DNA稀釋液。
2、使用前用移液器吹打混勻轉(zhuǎn)染試劑，立即往DNA稀釋液中加入適量的轉(zhuǎn)染試劑，用移液器輕輕混勻。
3、 將SP/DNA復(fù)合物室溫靜置15分鐘后，立即轉(zhuǎn)染。
注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。
C、轉(zhuǎn)染:
1、將擬轉(zhuǎn)染細(xì)胞強(qiáng)烈振蕩20-40秒，確保培養(yǎng)細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液，無細(xì)胞結(jié)團(tuán)；
2、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板。加完后，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
3、 培養(yǎng)24-96小時后收獲。
4、 SP在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基。因收獲蛋白需要，可以使用懸浮細(xì)胞培養(yǎng)專用的無血清培養(yǎng)基。
附表：不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件
| 培養(yǎng)皿 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 | 10cm皿 | |
| 表面積(cm2) | 0.35 | 1.0 | 1.9 | 3.8 | 9.6 | 59 | |
| Trans buffer、試劑、DNA量 | Trans buffer (ul) | 10 | 25 | 50 | 100 | 200 | 1000 |
| SP (ul) | 0.25 | 0.6 | 1.2 | 2.4 | 4.8 | 24 | |
| 1ug/ul plasmid (ul) | 0.16 | 0.4 | 0.8 | 1.6 | 3.2 | 16 | |
| 培養(yǎng)基(ml) | 0.10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 | |
保存方法：
2-8℃避光保存，Trans buffer可保存于2-8℃有效期一年，使用前請先將本品輕輕混勻。
注意事項：
、1、對于24孔板，轉(zhuǎn)染前接種細(xì)胞量以（2-4）x105細(xì)胞為宜，轉(zhuǎn)染時細(xì)胞生長狀態(tài)應(yīng)保持良好，不要有支原體污染。
2、剛開始轉(zhuǎn)染，建議進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，如24孔板，可將細(xì)胞接種3個孔，每孔接種細(xì)胞數(shù)分別為2x105 、 3x105 、4x105，次日質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染24小時后觀察轉(zhuǎn)染效果，選擇轉(zhuǎn)染陽性率較高的細(xì)胞接種數(shù)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3、應(yīng)避免轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備體系中存在血清，因血清會干擾 SP 與DNA形成復(fù)合物，轉(zhuǎn)染所用培養(yǎng)基中盡量不要使用抗生素。
4、為了提高轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)板可放于微型振蕩器上培養(yǎng)或每隔1小時人工振蕩1次（非常重要）。
5、懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染難度大，且受細(xì)胞種類、細(xì)胞密度、細(xì)胞生長情況、培養(yǎng)方法、操作手法等因素的影響，研究者在轉(zhuǎn)染之前，應(yīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，認(rèn)真準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染方案。
6、本試劑主要用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染，如需質(zhì)粒DNA、RNA、siRNA均可轉(zhuǎn)染的試劑，請選擇SP懸浮細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑（abs60325）。
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