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德國拜發(fā)甘油檢測試劑盒
甘油檢測試劑盒
（酶學試劑盒）
| 訂貨號： | 10148270035 |
| 產品名稱： | 甘油（Glycerol ） |
| 產品英文名稱： | Glycerol |
| 包裝： | Ca.3 x 11 tests |
| 產品介紹： | 如下 |
| 產品說明： | Glycerol （用于檢測食品中的甘油） |
酶法分析試劑盒（紫外分光光度法）
RIDASCREEN（產品編號：0 414 433） 30次檢測
1. 簡介
酶法分析試劑盒（紫外分光光度法）此法適用于檢測食品（啤酒、葡萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒）、化妝品、藥品（溶液、栓劑）、紙板、煙草及生物制品中的甘油。
2. 原理
甘油在甘油激酶的催化下可被ATP磷酸化為3-磷酸甘油酯，ATP轉化為ADP； 反應式為
GK
Glycerol﹢ATP L-glycerol-3-phosphate﹢ADP
上式中形成的ADP在丙酮酸激酶的催化下可與PEP作用下生成ATP及丙酮酸酯； 反應式為
PK
ADP﹢PEP ATP﹢Pyruvate
丙酮酸酯在L-乳酸酯脫氫酶的作用下可被NADH還原為L-乳酸酯，NADH被氧化為NAD； 反應式為
L-LDH
Pyruvate﹢NADH﹢H﹢ L-lactate﹢NAD﹢
被氧化的NADH的量取決于甘油的量，NADH的吸光度值可在334，340及365nm下測量。
3. 試劑盒內容物
----瓶1共有3瓶，每瓶約有2g輔酶及緩沖液的混和物，包括：甘氨酰甘氨酸緩沖液， PH約7.4； NADH約7mg；ATP約22mg；PEP-CHA約11mg；硫酸鎂
----瓶2約0.4ml懸浮物，包括：
丙酮酸激酶，約240U； L-乳酸酯脫氫酶，約220U
----瓶3約0.4ml甘油激酶懸浮物，約34U
----瓶4為甘油檢測對照溶液（甘油檢測對照溶液可不需要計算結果），此溶液使用時不需稀釋。（效期見標簽）
4. 檢測溶液的制備 （10次）
----取出1瓶瓶1， 用11ml重蒸水溶解，使用時此溶液需在20-25℃持續(xù)回溫約10分鐘
----瓶 2不需稀釋
----瓶 3不需稀釋
5. 操作者應該注意之事項
使用前請仔細閱讀，中文翻譯件僅供參考
----瓶1約含500mg碳酸鈉，應避免接觸皮膚和呼吸器官，其他用于甘油檢測的試劑不具有危險性
----實驗之后，用過的試劑可作為實驗室廢料處理，但必須在當地法規(guī)允許的前提下
6. 儲存條件
----瓶 1在2-8℃下保存（見標簽），溶液1在2-8℃下可保存4天，溶液1使用前需回溫至20-25℃
----瓶2及3在2-8℃下保存（見標簽）
7. 樣品處理
----直接取用無色，透明，中性的溶液或按稀釋表格稀釋后進行檢測，體積為2.000ml
----過濾混濁溶液
----除去樣品溶液中的二氧化碳氣體
----加入氫氧化鈉或氫氧化鉀來調節(jié)酸溶液的PH值約為8
----對于深顏色的樣品溶液可不需稀釋或者用PVPP或酰胺配成較高濃度的溶液如：1g/100ml
----粉碎或均質固體和半固體樣品，用水抽提或溶解，而后過濾，通過Carrez澄清液可脫去其中的混濁物或色素
----用Carrez試劑可脫去樣品中的蛋白質
----用熱水抽提樣品中的脂肪（抽提溫度需在脂肪的溶解度之上），冷卻后可分離出脂肪，將余下物質轉移至容量瓶中并加水至刻度，冰浴15分鐘而后過濾，熱水抽提后用Carrez溶液澄清
8. 過程
1. 波長：340nm，Hg365nm或Hg334nm
2. 比色杯：光徑1.0cm
3. 溫度：20-25℃
4. zui終體積：3.020ml
5. 對照空氣（光路上無比色杯）或對照水讀取讀數
6. 樣品溶液：1-40ug甘油/檢測（體積為0.100-2.000ml樣品體積）
7. 具體操作見如下表格
移液 | 空白（ml） | 樣品（ml） |
溶液1 樣品溶液 重蒸水 懸浮物2 | 1.000 - 2.000 0.010 | 1.000 0.100 1.900 0.010 |
混和，直至前反應*反應后，約5-7分鐘，讀取吸光度值A1，而后加入下列物質： | ||
懸浮物3 | 0.010 | 0.010 |
混和，等反應進行*后（約5-10分鐘），立即讀取樣品和空白的吸光度值A2 如果在15分鐘后反應尚未停止，則在2分鐘的間隔內繼續(xù)讀取讀數，直至此值不再變化。 | ||
分別測樣品與空白的吸光度值差，而后用樣品吸光度值差減去空白吸光度值差可以得到如下公式
△A=（A1 ―A2）Sample―（A1 ―A2）blank
若想得到一個足夠精確的結果，則測得的吸光度的單位至少為0.100單位。
如果吸光度值差△A在334及340nm下測得的值高于1.000或在365nm下測得的值高于0.500，如此則表明樣品溶液中甘油的濃度較高。
需根據稀釋表格進行樣品的稀釋
9. 計算
根據以下公式計算濃度
V×MW
C=-----------------------×△A（g/l）
ε×d×v×1000
V=zui終體積（ml）
V=樣品體積（ml）
MW=被檢測物質的摩爾質量
D=光徑（cm）
ε=NADH的消光系數
340nm=6.3（1×mmol-1×cm-1）
Hg365nm=3.4（1×mmol-1×cm-1）
Hg334nm=6.18（1×mmol-1×cm-1）
甘油含量計算遵循如下公式
3.020×92.1
C=----------------------------×△A
ε×1.00×0.100×1000
2.781
=----------------×△A（g甘油/l樣品溶液）
ε
如果樣品溶液是稀釋使用的，在計算結果時需乘以稀釋系數F。
當分析固體或半固體時，測量前需稱一定重量配制樣品溶液，其結果需按下式計算
C 甘油（g/l樣品溶液）
C甘油 =--------------------------×100（g/100g）
W 甘油（在樣品溶液中）
10. 檢測操作說明
被檢樣品中甘油含量在1ug至40ug之間。
為了得到一個足夠的吸光度值差，樣品溶液的濃度稀釋在0.04g/L至0.4g/L之間。
稀釋表格
每升樣品溶液中甘油估計量 |
用水稀釋 |
稀釋倍數 |
﹤0.4g 0.4-4g 4.0-40g ﹥40g | - 1﹢9 1﹢99 1﹢999 | 1 10 100 1000 |
如果測得的吸光度值△A較低，例如低于0.100，則樣品溶液需重新配制，可由下列幾種解決方法
1. 可多稱出些樣品或不要過分稀釋。
2. 加入到比色杯中的溶液體積可增加至2.000ml，當然為了得到相同的zui終體積（樣品和空白），加入的水的體積就要相應減少。所加入的新溶液的體積在計算時是要考慮進去的。
11. 技術信息
加入懸浮物2（PK/L-LDH）后等待前反應進行*后是非常必要的。
12. 特性
此法特異性適于甘油的檢測。
13. 靈敏度和檢測限
1. zui小的吸光分辨率為0.005個吸光單位，相應的zui大樣品體積為2.000ml，340nm下測量，則樣品的甘油濃度為0.1mg/L；若樣品體積為0.100ml，則樣品的甘油濃度為2mg/L。
2. 340nm下，吸光度值差為0.020可導出檢測限為0.4mg/L，相應的zui大體積為2.000ml。
14. 線性
從1ug甘油/檢品（0.4mg甘油 /L樣品溶液，樣品溶液V=2.000ml）到40ug甘油/檢品（0.4g甘油/L樣品溶液，樣品V=0.100ml）
15. 精確性
用同一樣品溶液做平行測定時，其吸光度值差會有0.005至0.010的差異，樣品體積為0.100ml，340nm下測量，相應的甘油濃度約為2-5mg/L；若樣品是經過稀釋的，則在計算結果時需乘以稀釋倍數。
16. 干擾信息來源
ATP和PEP的緩慢水解同NADH的緩慢氧化均可導致緩慢的蠕變反應；空白和樣品的吸光度值可不必逐一立即檢測。
17. 檢測過程中的干擾
1. 根據過程中所給定的時間甘油若能轉化*，則可斷定沒有干擾發(fā)生。
2. 反應結束后，可加入一些甘油重新檢測（定性或定量）：如果加入標準物質后，吸光度值會隨之改變，則可斷定沒有干擾發(fā)生。
3. 操作過程中的錯誤和干擾可通過兩個樣品體積的平行實驗測得（如0.100ml和0.200ml）：測得的吸光度值差應與樣品體積成比例關系。
當測定固體樣品時，可稱取不同質量（如1g和2g）于同一100ml容量瓶中，測得的吸光度值差及樣品的質量應與樣品的體積成比例關系。
4. 樣品所含物質帶來的可能干擾可通過加入內標來控制：除去樣品、空白及標準的檢測外，樣品加檢測對照溶液也要檢測的，測得的吸光度值差可計算干擾。
5. 通過回收試驗可測定可能的損失：分別測定加入標準與不加入標準的樣品，在誤差范圍之內可定量測定附加物。
18. Carrez試劑的澄清作用
----移取液體樣品于盛有60ml重蒸水的100ml容量瓶中或稱取足夠重量的樣品于100ml容量瓶中
----加入60ml重蒸水
----仔細加入5mlCarrez-Ⅰ-溶液（85mM，3.60gK4Fe（CN）6*3H2O/100ml）和5ml Carrez-Ⅱ-溶液（250mM，7.20gZNSO4*7H2O/100ml）
----用氫氧化鈉調節(jié)溶液PH于7.5-8.5，加入每一溶液后需充分混和，加水至容量瓶刻度，混和并過濾
19. 應用舉例
1.果汁中甘油的檢測
----稀釋樣品其濃度約在0.4g/L以下（見稀釋表格）
----過濾混濁果汁，取用透明或淡色溶液用于檢測
當分析深色果汁時（如：草莓汁和紅葡萄汁）需要先脫色
具體操作
----在10ml果汁中加入0.1g酰胺粉末或PVPP
----攪拌1分鐘后過濾
----取透明溶液用于檢測，該溶液可帶有輕微顏色
2.酒中甘油的檢測
----根據稀釋表格將樣品進行稀釋
----實際上紅酒不需脫色也可進行檢測
3.啤酒中甘油的檢測
----取5-10ml啤酒用玻璃棒攪拌約1分鐘，除去其中的二氧化碳氣體
----根據稀釋表格稀釋脫去二氧化碳氣體后的樣品
4.煙草制品中甘油的檢測
----充分混合并絞碎樣品
----精確稱取1g樣品于100ml容量瓶中
----加入約70mL水磁力攪拌約1小時20-25℃下，而后加水至刻度，混和并過濾
----移取25ml濾液于50ml容量瓶中
----加入5mlCarrez-Ⅰ-溶液，5ml Carrez-Ⅱ-溶液及10ml氫氧化鈉溶液，在加入每一溶液后均需充人混和
----加水至刻度混和并過濾，取濾液用于檢（0.100ml-0.500ml）
5.化妝品中甘油的檢測
6.發(fā)酵產品及生物培養(yǎng)基中甘油的檢測
----置樣品（可先經過離心）于80℃水浴中15分鐘以停止酶的反應
----離心并取上層溶液（可根據稀釋表格稀釋）用于檢測
----另外可用高氯酸或Carrez溶液脫除蛋白質
瓊脂培養(yǎng)基需先均質，而后按以上方法進行操作。
德國拜發(fā)甘油檢測試劑盒
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