您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)
會(huì)員.png)
8
細(xì)胞不貼壁、生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)不好、甚至死亡的可能原因及解決方法
在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細(xì)胞生長(zhǎng)角度來(lái)說(shuō)，針對(duì)細(xì)胞不貼壁、生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對(duì)應(yīng)的解決方法。
一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
可能原因：
●胰蛋白酶消化過(guò)度
●支原體污染
●培養(yǎng)基pH值過(guò)堿（NaHCO3分解）
●細(xì)胞老化
●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高
解決方法：
●縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度
●分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
●使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2
●啟用新的保種細(xì)胞
●調(diào)節(jié)接種細(xì)胞濃度
二、懸浮細(xì)胞成簇
可能原因：
●培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子；
●支原體污染；
●蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解；
●DNA污染
解決方法：
●用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液；
●分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體；
●用DNaseI處理細(xì)胞
三、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢
可能原因：
●由于更換不同培養(yǎng)液或血清；
●培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞；
●培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；
●試劑保存不當(dāng)；
●接種細(xì)胞起始濃度太低；
●細(xì)胞已老化；
●支原體污染
解決方法：
●比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；
●換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子；
●用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；
●血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；
●增加接種細(xì)胞起始濃度；
●換用新的保種細(xì)胞；
●分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
四、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)不好
可能原因：
●細(xì)胞本身的狀態(tài)
細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化；
細(xì)胞的接種量：接種量過(guò)低，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢；
細(xì)胞傳代時(shí)間過(guò)晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長(zhǎng)；
胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短：時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，細(xì)胞死亡；時(shí)間過(guò)短，細(xì)胞未*分離而成團(tuán)，細(xì)胞死亡；
細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。
●污染
支原體污染
霉菌污染
●培養(yǎng)基或血清
更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證
選擇的培養(yǎng)基是否合適
培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無(wú)誤
●培養(yǎng)環(huán)境
CO2供應(yīng)是否正常
培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確
…………
解決方法：
根據(jù)以上四個(gè)方面的可能原因，做出針對(duì)性的解決方案
●注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；
●避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）
●要用合適的血清或培養(yǎng)基，需要經(jīng)過(guò)驗(yàn)證
●注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境
五、培養(yǎng)細(xì)胞死亡
可能原因：
●培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2；
●培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大；
●細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷；
●培養(yǎng)液滲透壓不正確；
●培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積
解決方法：
●檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；
●檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；
●取新的保存細(xì)胞種；
●檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓；
●換入新鮮培養(yǎng)液