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小鼠巨噬細(xì)胞Ana-1使用說(shuō)明書(shū)
小鼠巨噬細(xì)胞；Ana-1使用說(shuō)明書(shū)
品名稱 ：小鼠巨噬細(xì)胞；Ana-1
生長(zhǎng)特性 ： 貼壁生長(zhǎng)
形態(tài)特性
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清，10%
傳代方法 1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體應(yīng)用：
1、細(xì)胞因子檢查試劑盒，如白介素、腫瘤壞死因子、干擾素、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、凋亡因子等等； 2、心肌梗塞檢查ELISA試劑盒，如肌鈣蛋白、肌紅蛋白、C-反響蛋白等等；
3、內(nèi)分泌檢查ELISA試劑盒，如甲狀腺、胰腺、性激素、孕酮、睪酮、生長(zhǎng)激素、生長(zhǎng)抑素、催乳素、促腎上腺皮質(zhì)激素等等；
4、肝纖維化檢查ELISA試劑盒，如纖維連接蛋白、膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶，層粘蛋白等等；
5、本身免疫檢查，如甲狀腺、抗核抗體、DNA、抗胰島細(xì)胞抗體、蛋白酶、角蛋白抗體、
核糖體蛋白抗體、抗聚角蛋白微絲蛋白抗體、抗平滑肌抗體等等。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，吹打均勻后，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進(jìn)行凍存。
培養(yǎng)操作步驟
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。