IL-23響應型STAT3熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種工程化的HEK293細胞系，表達受STAT3響應元件控制的螢火蟲熒光素酶，以及人類IL-23受體復合體（IL12Rβ1 NM_005535.3 和 IL23R NM_144701.3）。利用這一細胞系，可以通過測量熒光素酶活性來監(jiān)測IL-23活性。

IL-23響應型STAT3熒光素酶報告基因HEK293細胞系的功能已通過使用重組人類白細胞介素23（人類IL-23；p19 + p40）的劑量反應實驗、使用抗IL-23抗體烏司他木單抗和古塞庫單抗的抑制實驗，以及Janus激酶抑制劑魯索利替尼的實驗進行了驗證。

背景

IL-23是由p40和p19組成的異源二聚體復合物，是一種由激活的巨噬細胞和樹突狀細胞產生的促炎細胞因子。這種細胞因子通過促進輔助T細胞產生干擾素-γ（IFN-γ）和支持分泌IL-17的CD4+ T細胞的增殖，在免疫反應中發(fā)揮著至關重要的作用。由于它涉及多種自身免疫疾病，包括炎癥性腸?。↖BD）、結腸炎、銀屑病和關節(jié)炎，目前正在大力開發(fā)能夠拮抗IL-23信號通路的試劑。

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應用

篩選和表征抗IL-23抗體

細胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細胞的小瓶大約60秒。細胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將小瓶的全部內容轉移到含有10 ml預熱的解凍培養(yǎng)基1的試管中。

注意：在37°C水浴中放置細胞過久將導致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細胞在5 ml預熱的解凍培養(yǎng)基1中重懸。

3. 將重懸的細胞轉移到T25培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時后，檢查細胞附著和活性。更換培養(yǎng)基為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并繼續(xù)在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細胞準備好分裂。

5. 細胞應在w全融合前傳代。在s次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基1U。

細胞傳代

1. 抽去培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養(yǎng)基1U并轉移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細胞在生長培養(yǎng)基1U中重懸。

4. 按照推薦的亞培養(yǎng)比例1:5至1:8，每周一次或兩次將細胞種入新的培養(yǎng)容器中。

細胞冷凍

1. 抽去培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養(yǎng)基1U并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細胞在4°C冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸，細胞濃度為1~2 x 10^6個細胞/ml。

4. 將1 ml的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下保存過夜。

5. 次日將小瓶轉移到液氮中長期保存。

注意：建議在早期傳代時擴增細胞并至少冷凍10個小瓶以備將來使用。

圖. 通過流式細胞儀分析IL-23響應型STAT3熒光素酶報告基因HEK293細胞系中IL23R和IL12Rβ1的表達。

IL-23響應型STAT3熒光素酶報告基因HEK293細胞（綠色或粉紅色）或對照STAT3熒光素酶報告基因HEK293細胞（藍色）分別用人類IL12Rβ1 PE偶聯抗體（右圖；R&D系統 #FAB839P）和人類IL23R PE偶聯抗體（左圖；R&D系統 #FAB14001P）進行細胞內染色，并通過流式細胞儀分析。Y軸代表細胞數量百分比。X軸表示PE的強度。

文獻參考：

Yang K., et al., 2021 Am J Clin Dermatol. 22(2): 173-192.

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