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            轉(zhuǎn)基因品系棉花GHB614 PCR試劑盒

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            • 型號(hào) 50T
            • 品牌 其他品牌
            • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
            • 所在地 上海市

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            更新時(shí)間:2021-02-28 19:14:43瀏覽次數(shù):320

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            產(chǎn)品簡(jiǎn)介

            CAS 詳見說明書 純度 詳見說明書
            分子量 詳見說明書 分子式 詳見說明書
            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
            貨號(hào) FS-L63763 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
            主要用途 公司產(chǎn)品僅用于科研    
            轉(zhuǎn)基因品系棉花GHB614 PCR試劑盒保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

            詳細(xì)介紹

            服務(wù)流程:
            接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

            產(chǎn)品名稱

            產(chǎn)品規(guī)格

            貨號(hào)

            轉(zhuǎn)基因品系棉花GHB614 PCR試劑盒

            50T

            FS-L63763

            儲(chǔ)存條件:
            14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
            1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
            2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
            3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
            4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
            5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
            ?
            實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
            1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
            2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
            3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
            4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
            實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
            綠草定(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-c-Abl (Tyr245) (73E5) Rabbit mAb2-[[(2'-基聯(lián)-基)甲基]氨基]-甲酸酯

            雙硫(標(biāo)準(zhǔn)品)5-Methylcytosine (5-mC) (D3S2Z) Rabbit mAb鹽酸度洛西汀

            *基化錫(標(biāo)準(zhǔn)品)Syntaxin 6 (C34B2) Rabbit mAb1-溴-2-氟-

            氟樂靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5%)Syntaxin 6 (C34B2) Rabbit mAb羧基-酸

            殺蟲脲(標(biāo)準(zhǔn)品)MEK1/2 (D1A5) Rabbit mAb (PE Conjuga)N'-BOC-L-鳥氨酸;N'-叔丁氧羰基-L-鳥氨酸

            異中殺蟲脲標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)Bcl-2 Antibody (Human Specific)2,6-二氟酮

            異中殺蟲脲標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)Bcl-2 Antibody (Human Specific)2,6-二氟甲酸甲酯

            四基錫(標(biāo)準(zhǔn)品)ATM (D2E2) Rabbit mAb5-甲基-2-噻吩甲

            戊菌隆(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%)ATM (D2E2) Rabbit mAb1-甲基-1H-咪唑-磺酰

            噻螨酮標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)Phospho-Bcl-2 (Thr56) Antibody (Human Specific)5-甲基喹喔啉

            噻螨酮標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)Phospho-Bcl-2 (Thr56) Antibody (Human Specific)二叔丁基化膦

            抑霉唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)FE65 Antibody三叔丁基膦

            環(huán)草隆(標(biāo)準(zhǔn)品)CASK Antibody碳酸鎂

            2,4,5-涕酸(標(biāo)準(zhǔn)品)LITAF Antibody甲氧基-

            西瑪津(標(biāo)準(zhǔn)品)FoxO1 (C29H4) Rabbit mAbBoc-L-羥脯氨酸

            西瑪津標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5%)FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb[2-(2-氨基-4,7-二氫-氧代-3H-吡咯并[2,3]嘧啶-5-基)基]甲酸

            氟蟲(標(biāo)準(zhǔn)品)ERp57 (G117) Antibody

            五標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%,基體:)ERp57 (G117) Antibody-氟酸
            轉(zhuǎn)基因品系棉花GHB614 PCR試劑盒TLC法鑒別98%500ml

            硝普鈉 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格: 200mg 化自噬相關(guān)蛋白9A抗體 BH4 ELISA Kit 四氫生物蝶呤(BH4)ELISA試劑盒

            STE/TNE緩沖液58812376−20°C干燥避光保存L2氨基丁HPLC≥98%醛脫氫酶檢測(cè)試盒20mgS100A11培養(yǎng)基,培養(yǎng)基, 葡萄糖肉浸液肉湯

            FUS/TLS ELISA kit半枝蓮

            洛匹那韋(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Lopinavir 小鼠骨髓瘤淋巴細(xì)胞英文名稱:N-H

            標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, 維生素A

            TLC法鑒別98%100ml

            二十二(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) Docosane  薛瓦酵母 Saccharomyces chevalieri大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)

            標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, 維生素A醋酯
            實(shí)驗(yàn)過程:
            一、試劑準(zhǔn)備
            1. DNA模板
            2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
            3.10×PCR Buffer
            4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
            5.Taq酶
            二、操作步驟
            1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
                  10×PCR buffer             5μl
                  dNTP mixl                 4μl
                  引物1(10pM)               2μl
                  引物2(10PM)              2μl
                 Taq酶(2U/μl)            1μl
                 DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
                  加ddH2O至               50 μl
                視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
            2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
            3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
            4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
            檢測(cè)方法包括以下步驟:
            (1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
            (2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
            其中步驟(1)為:將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
            其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
            步驟(2)為:待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
            其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

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