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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒20次
產(chǎn)品貨號：FS-P013336
產(chǎn)品規(guī)格：20次
產(chǎn)品分類：純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
Collagenase II ELISA Kit 大鼠膠原IIMulti-class antibodies： 48T
Tenascin C/Tn-C 細(xì)胞粘合(固生蛋白)抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh GluR1/AMPA 谷受體1抗體 0.1ml
Pro-ANP(Mouse Pro Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit 小鼠前心鈉肽 96T
NDUFV1 NADH脫氫黃蛋白1抗體 0.2ml
Apelin 脂肪炎癥因子Apelin抗體 0.1ml
Tenascin C/Tn-C 細(xì)胞粘合(固生蛋白)抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Apaf-1(Human apoptosis protease activating factor-1) ELISA Kit 人凋亡蛋白激活因子1Multi-class antibodies： 48T
HDAC10 組蛋白去乙?；?0抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh MEIS1 同源盒蛋白Meis1抗體 0.1ml
ICD(Human isocitrate dehydrogenase) ELISA Kit 人異檸檬脫氫 96T
RAP1GDS1 G蛋白GTP-GDP解離刺激因子1抗體 0.1ml
C1orf192 1號染色體開放閱讀框192抗體 0.2ml
HDAC10 組蛋白去乙酰化10抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rabbit mouse IgG-Fc/Bio 生物標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1ml
GOLGA7 高爾基體膜相關(guān)蛋白7抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Amphiregulin 雙調(diào)蛋白(結(jié)腸直腸細(xì)胞源性生長因子)抗體 0.1ml
Integrin Alpha6/CD49f/VLA-6/FITC 熒光標(biāo)記整合α6抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit horse IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗馬IgG 0.5ml
phospho-SHC (Tyr349) /FITC 熒光標(biāo)記磷化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒20次人線粒體肌1B（CKMT1B）elisa檢測試劑盒
人胸腺表達(dá)趨化因子（TECK/CCL25）elisa檢測試劑盒
人脫氫表雄酮S7（DHEA-S7）elisa檢測試劑盒
人胃泌抑制肽（GIP）elisa檢測試劑盒
人基質(zhì)金屬蛋白23B（MMP23B）elisa檢測試劑盒
人角蛋白21-1片段（CYFRA21-1）elisa檢測試劑盒
人纖維介蛋白（FGL2）elisa檢測試劑盒
人TERF1相互作用核因子2（TINF2）elisa檢測試劑盒
人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物（GTEAGE）elisa檢測試劑盒
人纖維蛋白原α（FGα）elisa檢測試劑盒
人?；囸I（A-GHRL） elisa檢測試劑盒
人補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白4（CFHR4）elisa檢測試劑盒
人組織型纖溶原活因子（tPA）elisa檢測試劑盒
人纖維蛋白（FBL）elisa檢測試劑盒
人小泛相關(guān)修飾蛋白2 （SUMO2）elisa檢測試劑盒
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