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            人脂多糖(LPS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒專業(yè)代測

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            人脂多糖(LPS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒專業(yè)代測

            本試劑盒僅供研究使用。

            檢測范圍:

            20µg/L-480µg/L

            使用目的:

            本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中脂多糖(LPS)含量。

            實驗原理

            本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人脂多糖(LPS)水平。用純化的人脂多糖(LPS)

            抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入脂多糖(LPS),再與HRP

            標記的脂多糖(LPS)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物

            TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏

            色的深淺和樣品中的脂多糖(LPS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),

            通過標準曲線計算樣品中人脂多糖(LPS)濃度。

            試劑盒組成

            130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

            2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(960µg/L)0.5ml×1瓶

            3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

            4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

            5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

            6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

            標本要求

            1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

            馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

            2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

            操作步驟

            1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

            釋。

            480µg/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液

            240µg/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液

            120µg/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液

            60µg/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液

            30µg/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液

            2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、

            待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,

             

            然后再加待測樣品10µl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡

            量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

            3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

            4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

            5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此

            重復5次,拍干。

            6.加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。

            7.溫育:操作同3。

            8.洗滌:操作同5。

            9.顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

            15分鐘.

            10.終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

            11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止

            液后15分鐘以內(nèi)進行。

            操作程序總結(jié):

            計算

            以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的

            OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標

            準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),

            即為樣品的實際濃度。

            注意事項

            1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

            用完,板條應裝入密封袋中保存。

            2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

            3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

            控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

            4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值

            大于標準品孔di一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計

            算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

            5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

            6.底物請避光保存。

            7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

            8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

            9.本試劑不同批號組分不得混用。

            10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

            保存條件及有效期

            1.試劑盒保存:;2-8℃。

            2.有效期:6個月

             

             

             

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