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技術文章 > Lonza 4D-Nucleofector電轉百科指南：如何提高電轉染效率？
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Lonza 4D-Nucleofector電轉百科指南：如何提高電轉染效率？
2023-6-16 閱讀(176)
在之前的“電轉知識"文章中，我們已經了解了轉染技術的起源與發(fā)展，包括各類轉染方式的優(yōu)缺點：
以及在電轉方法中，Lonza 4D Nucleofector™平臺所能提供的設備型號：
Nucleofection™ 核轉--5步簡單的操作方案，實現(xiàn)輕松電轉
那么選擇電轉方法后，該如何提高電轉染效率呢？Lonza電轉技術專家為大家總結了以下八點：
準備好加了新鮮培養(yǎng)基的多孔板，并在實驗前于37°C下預平衡
使用傳代次數(shù)少并具有推薦融合度或密度（對數(shù)生長期）的細胞
針對于貼壁細胞，需限制胰蛋白酶暴露時間，仔細監(jiān)測細胞分離情況
根據(jù)優(yōu)化方案進行細胞計數(shù)并使用適量細胞數(shù)；所用細胞過少可能導致細胞死亡率增加，所用細胞過多可能導致細胞電轉效率降低
采用高質量DNA，使用內毒素去除試劑盒進行純化；請通過測定A260:A280比值檢查各質粒制備液的純度
室溫下以離心速度80-100×g和方案規(guī)定的時間進行離心
離心后加入Nucleofector™溶液，混勻溶液/細胞沉淀制備成單細胞懸液，避免對細胞沉淀進行額外操作或用移液器槍頭重復抽吸
Nucleofection™核轉后，用核轉試劑盒內配的一次性移液管在電轉耗材中的細胞頂部加入約500μL預熱培養(yǎng)基
