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            LabChip GXII Touch-貫穿蛋白研發(fā)流程的快速分析

            2023-10-18  閱讀(144)

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            LabChip GXII Touch為生物治療藥物流程各個環(huán)節(jié)提供快速定量和樣品質(zhì)控。例如,自動化的表征檢測使用戶可以更快地獲得多個關(guān)鍵的質(zhì)量屬性。如今, 研究者們可在研發(fā)流程的更早期篩選出具備最佳指征的蛋白,并將“質(zhì)量源于設(shè)計"的理念整合到生物治療藥物開發(fā)流程中(圖 5)。

            小規(guī)模高通量工藝開發(fā)

            工藝參數(shù)

            純化和樣品制備



            JANUS BioTx Pro

            工作站

            關(guān)鍵質(zhì)量屬性的測定



            信息學(xué)

            工藝結(jié)果

            圖 5. 利用 LabChip 微流體技術(shù)和 JANUS@Bio TX工作站, 您可以一天內(nèi)完成使用其他方法通常需要幾周才能完成的樣品純化和分析。探索更廣泛的實驗條件,節(jié)約您的生物治療藥物研發(fā)時間和成本(如上圖)。LabChip Touch 試劑可用千多種蛋白屬性分析,包括標準和皮克級的蛋白質(zhì)(圖 6)。



            圖 6. 標準和皮克級靈敏度的蛋白質(zhì)檢測實驗

            LaChip GXII Touch在 AAV衣殼蛋白分析中,提高了AAV純度分析的速度、通量和數(shù)據(jù)質(zhì)量。 AAV衣殼由三種病毒蛋白(VP1、VP2 和 VP3)組成,其比例、鑒別、純度影響藥物效能和效價強度,需要被鑒定并監(jiān)控以確保藥物質(zhì)量。利用 SDS存在下的微流控毛細管電泳技術(shù)分離 AAV衣殼蛋白,并測定每種病毒衣殼蛋白的大小和濃度。LabChip® GXII TouchTM 系統(tǒng)的ProteinEXactTM 試劑采用系統(tǒng)校準步驟,可實現(xiàn)高精度重現(xiàn)性,并具有更高的靈敏度和較寬的分析范圍。65秒內(nèi)即可完成樣品分析。這種高通量的分析方法可以同時測定 96份 AAV樣品,并提供傳統(tǒng)毛細管電泳可比結(jié)果(圖 7)。



            圖 7. AAV8 變性后衣殼蛋白Labchip電泳圖祥品重現(xiàn)性好

            AAV動力學(xué)觀察實驗的應(yīng)用:LabChipTM GXII TouchTM 蛋白鑒定系統(tǒng)能夠在 30-50秒內(nèi)收集多達 300個實驗點,這可能為衣殼蛋白提供額外的信息。部分變性衣殼可由不同蛋白質(zhì)分子量(單體、二聚體、三聚體等)的混合物組成,如圖 8所示。在實驗期間。在1%SDS 和 TE緩沖液中加入 AAV樣品的 96孔板被加熱到特定的溫度進行變性,隨后進行檢測。



            圖 8A和 8B:動力學(xué)實驗中部分變性的 AAV8 (圖 8B—只顯示二聚體)

            LabChip® GXII TouchTM 蛋白分析系統(tǒng)平臺提供 AAV 衣殼蛋白的全面分析的能力。該方法為 AAV衣殼蛋白鑒定提供了一種決速、高通量、穩(wěn)定可靠的方法。高重現(xiàn)性和準確的衣殼成分檢測可以作為重組 AAV病毒顆粒表征的新方法,是基因治療應(yīng)用的關(guān)鍵一步。

            LabChip® GXII Touch 抗體表征應(yīng)用

            圖 9 展示了濃度為 1mg/mL的非還原MAb的電泳圖譜示例。左側(cè)插圖可見低含量片段,例如輕鏈、重鏈、重-輕鏈、重-重鏈、重-重-輕鏈和完整 MAb均實現(xiàn)良好分離。還原 MAb的電泳圖譜如圖 10所示,圖中可見非糖基化重鏈(NGHC)與重鏈之間具有足夠的分辨率,可進行準確定量。




            圖 9. 非還原MAb電泳圖,顯示有片段和完整MAb的%純度。位于大約 17.5 秒處標記為 X 的峰是加入抗體中用作內(nèi)標物的溶菌酶。LM是內(nèi)標,Xsys是系峰。



            圖 10. 還原 MAb 電泳圖譜

            工作原理

            LabChip電泳在小型微流體芯片上進行。分析之前, 將試劑裝載到芯片的各個孔中。這些孔與蝕刻有微小通道的石英片基相連, 每個微通道僅有人的發(fā)絲 粗細(圖 11)。

            將芯片裝入 LabChip GXII Touch 系統(tǒng)后, 芯片孔與鉑 電極接觸, 由鉑電極提供電壓和電流控制。系統(tǒng)機 楲臂將微孔板上的樣品孔直接移動到芯片毛細管 “吸管"下方, 大約 150nL 樣品被抽吸到芯片上。 樣品染色和脫色由系統(tǒng)平臺自動完成。

            待分析樣品逐一被電泳分離, 然后通過激光誘導(dǎo)的 熒光檢測樣品條帶。通過 ladder 和內(nèi)標確定各條帶 的大小和濃度。在各樣品分析之間清洗吸管, 從而 消除了交叉污染或殘留。



            圖 11. 蛋白質(zhì)研究用的 LabChip


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