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在抗體藥早期研發(fā)階段，需要從抗體庫中篩選出能特異性結合目標抗原且親和力較高的抗體，經(jīng)過一系列體外功能活性測定等對抗體進一步篩選，并進行優(yōu)化，最終獲得候選抗體。在抗體發(fā)現(xiàn)階段，一般會從幾千個樣本中篩選出600-1000個與抗原有結合活性的抗體，經(jīng)過初步篩選和成藥性評估后，得到10-20個候選抗體，然后再進行體外功能活性檢測，整個過程耗時約3-5個月。
從抗體藥發(fā)現(xiàn)到體外活性檢測會涉及到大量的ELISA實驗，不僅耗時而且耗力，瑞孚迪HTRF和AlphaLISA均相免洗平臺，提供抗體藥物研發(fā)不同階段的高通量檢測試劑，幫您準確、快速地完成多樣本的檢測。與ELISA相比，均相免洗技術省去了包被、洗板、顯色等步驟，只需要加樣-孵育-檢測，即可完成整個實驗，可節(jié)省您80%以上的人工和操作時間，也適用于自動化高通量設備。
一、抗體篩選和優(yōu)化
抗體篩選是抗體發(fā)現(xiàn)中的重要環(huán)節(jié)，對抗體發(fā)現(xiàn)的結果起到關鍵作用。在篩選早期，選擇合適的高通量篩選技術顯得尤為重要。
針對抗體的篩選和優(yōu)化，瑞孚迪提供一系列雜交瘤檢測試劑盒、阻斷性抗體和功能性抗體篩選試劑盒、抗體定量檢測試劑盒以及toolbox，滿足各種蛋白互作檢測、抗體含量檢測及親和力檢測的需求。
技術優(yōu)勢：
實現(xiàn)高通量的抗體篩選：實驗僅需加樣-孵育-檢測，2h即可完成
陽性檢出率更高：無需洗板，對于一些低親和力的陽性抗體，其檢出率更高
節(jié)省樣本：反應體系僅需20 ul，適合珍貴樣本的檢測
以Hybridoma binding kit (6HIS antigen)為例，該試劑盒使用夾心法檢測與6HIS標記抗原結合的小鼠雜交瘤上清液，試劑盒含有Eu供體標記的抗6HIS抗體和用D2受體標記的抗小鼠抗體，當樣本中雜交瘤克隆產(chǎn)生的小鼠抗體與6HIS標記的靶標結合時，產(chǎn)生HTRF信號，信號強度與小鼠雜交瘤抗體濃度成正比，原理如圖1所示。
圖1. Hybridoma binding kit (6HIS antigen)反應原理
① 雜交瘤檢測試劑盒（部分）
| 產(chǎn)品分類 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 平臺 |
| 小鼠雜交瘤 | 64HYHISPEG | Hybridoma binding kit (6HIS antigen) | HTRF |
| 大鼠雜交瘤 | 63ADK000CB39PEG | Hybridoma binding kit (6HIS antigen) | HTRF |
② 抗體篩選試劑盒（部分）
| 產(chǎn)品分類 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 平臺 |
| 抗體篩選-阻斷性抗體 | 64BDTNFPEG | Human TNFα/TNFR1 Binding Kit | HTRF |
| AL366C | Human EGF/EGFR binding kit | Alpha | |
| 抗體篩選-功能性抗體 | 6FTAUPEG | Tau Aggregation Kit | HTRF |
| 6FASYPEG | Alpha-Synuclein aggregation Kit | HTRF |
③抗體含量檢測試劑盒（部分）
| 產(chǎn)品分類 | 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 線性范圍 |
| IgG檢測 | 6FHIGPEG | HTRF Human IgG Detection Kit | 0.9 - 2000 ng/mL |
| AL205C | AlphaLISA Human IgG Detection Kit | 240 – 1 000 000 pg/mL | |
| Fc檢測 | 62HFCPEG | HTRF Human Fc Detection Kit | 5.5-4000 ng/mL |
| Kappa Light檢測 | 64KAPPEG | HTRF Human IgG Kappa MAb Detection Kit | 0.4-100 ng/mL |
| Lambda Light檢測 | 64LAMPEG | HTRF Human IgG Lambda MAb kit | 0.8-200 ng/mL |
④toolbox-自建體系
瑞孚迪PPI toolbox試劑包括Eu和Tb穴狀化合物以及 XL665 和 D2 標記的抗標簽抗體、抗種屬抗體和鏈霉親和素。您可以根據(jù)您靶點蛋白的標簽以及抗體的種屬/亞型等，選擇合適的供體和受體對，自己搭建合適的基于HTRF/Alpha的抗體篩選模型。
二、生物學活性檢測
瑞孚迪基于HTRF、Alpha均相技術平臺和化學方法平臺，可提供細胞表面受體結合、信號通路相關指標及殺傷活性等一系列檢測試劑，多維度表征抗體藥的體外生物活性，為抗體藥的研發(fā)、質(zhì)量控制提供重要支撐。
以cAMP Gs Dynamic Kit為例，該試劑盒基于競爭法，試劑盒含有Eu（供體）標記的特異性抗體和與D2偶聯(lián)的cAMP（受體），能夠檢測貼壁細胞或懸浮細胞中Gs偶聯(lián)受體的所有類型的化合物。細胞產(chǎn)生的天然cAMP與D2標記的cAMP競爭結合Eu標記的抗cAMP的抗體，從而阻斷HTRF信號，樣本中cAMP的含量與HTRF信號強度成反比，反應原理見圖2。
圖2. cAMP Gs Dynamic Kit反應原理
1. FcγR和FcRn結合活性
瑞孚迪Tag-lite®是一種基于細胞的檢測方法，用于測定針對FcγR和FcRn的特異性抗體結合情況，適用于ADCC活性抗體以及更長循環(huán)半衰期的抗體，還可用于評估抗體的去巖藻糖基化程度。
產(chǎn)品列表 (部分)
| 貨號 | 名稱 |
| 6FR3APAG | CD16a (FcgRIIIa, F158) cellular Kit |
| 62C16PAG | CD16a (FcgRIIIa, V158) cellular Kit |
| 64FCRNPET | FcRn Kit |
2. C1q結合活性
人C1q結合試劑盒用于檢測IgG的Fc端與人C1q 蛋白的結合情況。
| 貨號 | 名稱 |
| 64C1QPET | Human C1Q Binding Kit |
3. 信號通路檢測
① 第二信使檢測
抗體與細胞表面受體結合后，會引發(fā)細胞內(nèi)的信號轉導過程，第二信使在這個過程中起著關鍵的傳遞和放大信號的作用，通過檢測第二信使的水平變化，可以間接反映抗體藥物的活性。
產(chǎn)品列表（部分）
| 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 平臺 |
| 62IPAPEB | IP-One - Gq Kit | HTRF |
| 62AM4PEB | cAMP - Gs Dynamic Kit | HTRF |
| 62AM6PEB | cAMP - Gs HiRange Kit | HTRF |
| 62AM9PEB | cAMP - Gi Kit | HTRF |
② 磷酸化蛋白檢測
瑞孚迪提供穩(wěn)定便捷的HTRF&Alpha磷酸化蛋白檢測試劑盒，試劑盒應用經(jīng)典雙抗夾心的檢測模型，標記有供體和受體的特異性抗體識別磷酸化位點來檢測蛋白磷酸化水平，輕松實現(xiàn)2小時檢測磷酸化蛋白。省時，省力，靈敏度高，樣本消耗少，可替代諸如蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）、酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）或其他發(fā)光檢測等更為傳統(tǒng)的技術，使磷酸化蛋白檢測變得更加簡單高效。且提供總蛋白檢測試劑盒，適合做歸一化處理，進行客觀的數(shù)據(jù)分析。
產(chǎn)品列表（部分）
| 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 平臺 |
| 64AERPEG | HTRF ADV.ERK P-T202/Y204 KIT | HTRF |
| MPSU-PTERK-M500 | SF ULTRA MULTIPX P/T-ERK (EU/TB) NF | Alpha |
| 64AKSPEG | HTRF AKT P-S473 KIT | HTRF |
| MPSU-PTAKT-M500 | SF ULTRA MULTIPX P/T-AKT (EU/TB) NF | Alpha |
| 62AT3PEG | HTRF STAT3 P-Y705 KIT | HTRF |
| ALSU-PST3-A-HV | ALPHA.SF ULTRA STAT3 PY705, HV | Alpha |
③ 細胞因子檢測
抗體藥可通過調(diào)節(jié)免疫細胞的活性，使其分泌細胞因子來發(fā)揮作用。細胞因子是一類具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質(zhì)，參與調(diào)節(jié)固有免疫和適應性免疫、血細胞生成、細胞生長等多種生理過程。檢測細胞因子的分泌水平，可以評估抗體藥對免疫系統(tǒng)的激活或調(diào)節(jié)作用，以及其在免疫治療中的潛在效果。
產(chǎn)品列表（部分）
| 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 平臺 |
| 62HIL02V2PEG | HTRF Human High Performance IL-2 Detection kit | HTRF |
| AL221C | AlphaLISA Human IL-2 Detection Kit | Alpha |
| 62HTNFAPEG | HTRF Human TNF-α Detection Kit | HTRF |
| AL208C | AlphaLISA Human TNF-α Detection Kit | Alpha |
| 62HIFNGPEG | HTRF Human IFN-γ Detection Kit | HTRF |
| AL3154HV | AlphaLISA High Performance Biotin-Free Human IFNγ Detection Kit | Alpha |
④ 熒光素酶報告基因檢測
熒光素酶報告基因是體外研究信號通路的激活與調(diào)控的常用方法?？贵w藥與細胞表面受體結合后，會引發(fā)細胞內(nèi)一系列信號轉導通路的激活。通過構建含有熒光素酶報告基因的細胞模型，將熒光素酶基因置于待研究信號通路的關鍵轉錄因子或調(diào)控元件的下游，當抗體藥作用于細胞并激活相應信號通路時，會導致熒光素酶報告基因的表達上調(diào)，進而產(chǎn)生可檢測的熒光信號。
產(chǎn)品列表（部分）
| 貨號 | 名稱 |
| 6016711 | NEOLITE 100ML KIT |
| 6016719 | NEOLITE 1000ML KIT |
| 6066751 | STEADYLITE PLUS 100 ML KIT |
| 6066759 | STEADYLITE PLUS 1000ML KIT |
| 6066761 | BRITELITE PLUS 100ML KIT |
| 6066769 | BRITELITE PLUS 1000ML KIT |
4. 細胞殺傷檢測
抗體藥細胞殺傷檢測是評估抗體藥物有效性的關鍵環(huán)節(jié)。它主要用于衡量抗體藥物對靶細胞（如腫瘤細胞、病毒感染細胞等）的殺傷能力，這對于研究抗體藥的治療潛力、篩選優(yōu)化藥物候選物以及理解其作用機制等方面都具有極其重要的意義。
瑞孚迪基于HTRF平臺、Delfia平臺和化學發(fā)光平臺，針對不同的檢測需求，提供多種細胞殺傷檢測檢測試劑。
① 人Perforin-1和Granzyme B檢測
人Perforin-1和Granzyme B檢測試劑盒均采用HTRF均相檢測法，反應原理類似，以人Perforin-1試劑盒為例，該試劑盒含有兩種特異性抗人穿孔素抗體，它們分別用Eu穴狀化合物（供體）和 D2（受體）進行標記。信號強度與樣本中存在的穿孔素濃度成正比。
| 貨號 | 名稱 |
| 63ADK100PEG | Human Perforin-1 Kit |
| 63ADK095PEH | Human Granzyme B Kit |
② 基于ATP的細胞活力檢測
ATP廣泛存在于所有活細胞中，在正常的活細胞中，ATP的含量相對穩(wěn)定，當細胞受到抗體藥的殺傷作用時，細胞膜完整性被破壞，細胞內(nèi)的 ATP 會釋放到細胞外環(huán)境中。因此，通過檢測細胞培養(yǎng)上清或細胞裂解物中的 ATP 含量，可以反映細胞的存活狀態(tài)和抗體藥的細胞殺傷效果。
| 貨號 | 名稱 |
| 6016731 | ATP LITE 1-STEP, 100ML |
| 6016739 | ATP LITE 1-STEP, 1000ML |
③ DELFIA EuTDA細胞毒性檢測檢測試劑盒
該試劑盒利用瑞孚迪DELFIA® 時間分辨熒光（TRF）法，檢測原理與鉻釋放試驗相同，只不過其靶細胞負載的是一種 BATDA 配體，而非 51Cr，它不需要經(jīng)過特殊改造的細胞，用于測量化學細胞毒性、細胞介導的細胞毒性以及抗體依賴性細胞毒性（ADCC）。
| 貨號 | 名稱 |
| AD0116 | EUTDA CYTOTOXICITY ASSAY KIT |
推薦微孔板
將瑞孚迪的微孔板與Revvity的一系列檢測試劑、讀板機和自動化技術配對，以獲得最佳的檢測性能并簡化工作流程。
HTRF微孔板（部分）
Alpha微孔板（部分）
推薦酶標儀
瑞孚迪VICTOR Nivo —— 一款設計緊湊、多功能酶標儀
VICTOR Nivo酶標儀，是一款多功能微孔板檢測儀，這款多功能酶標儀功能強大、設計緊湊、操作簡便，將所有檢測模式置于業(yè)內(nèi)最小的臺式系統(tǒng)中?？蓹z測可見/紫外光吸收（ABS）、化學發(fā)光（LUM）、熒光強度（FI）、熒光偏振（FP）、時間分辨熒光（TRF）、Alpha等多種模式。
