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            賽爾瑞成(北京)生命科學(xué)技術(shù)有限公司

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            CRISPR/Cas9基因敲除細(xì)胞系/細(xì)胞株
            參考價: 面議
            具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
            • 產(chǎn)品型號
            • 賽爾瑞成 品牌
            • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
            • 北京市 所在地

            訪問次數(shù):1746更新時間:2024-12-03 08:02:30

            聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!
            產(chǎn)品簡介
            供貨周期 一個月以上 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
            主要用途 CRISPR/Cas9基因敲除細(xì)胞系/細(xì)胞株
            CRISPR/Cas9基因敲除細(xì)胞系/細(xì)胞株:賽爾瑞成采用CRISPR/Cas9系統(tǒng),提供基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)。賽爾瑞成根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)合成sgRNA,將Cas9和sgRNA基因轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞,進(jìn)而敲除目的基因,并進(jìn)行單克隆篩選,獲得基因敲除單克隆細(xì)胞系。
            產(chǎn)品介紹

             

            CRISPR/Cas9基因敲除細(xì)胞系/細(xì)胞株

             

            賽爾瑞成采用CRISPR/Cas9系統(tǒng),提供基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)。賽爾瑞成根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)合成sgRNA,將Cas9和sgRNA基因轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞,進(jìn)而敲除目的基因,并進(jìn)行單克隆篩選,獲得基因敲除單克隆細(xì)胞系。

             

            CRISPR/Cas9系統(tǒng)作為新一代基因編輯工具,因其構(gòu)建方便、設(shè)計(jì)靈活,操作簡單、效率高成本低,成為基因敲除的新一代利器。該系統(tǒng)由有DNA切割活性Cas9蛋白和識別特異靶點(diǎn)的sgRNA組成。Cas9是一種核酸內(nèi)切酶,它和sgRNA構(gòu)成的復(fù)合體能與DNA分子上的特定序列結(jié)合,并在PAM序列(幾乎存在于所有基因)上游切斷DNA雙鏈。DNA被切斷后,細(xì)胞會啟動DNA損傷修復(fù)機(jī)制,造成基因的缺失、移碼、插入等隨機(jī)突變模式,達(dá)到修復(fù)雙鏈斷裂的目的,同時造成靶向基因敲除。

             

            CRISPR/Cas9基因敲除細(xì)胞系/細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)流程

            內(nèi)容

            詳細(xì)信息

            服務(wù)周期

            gRNA 設(shè)計(jì)合成及載體構(gòu)建

            gRNA 設(shè)計(jì)及合成 、載體構(gòu)建、質(zhì)粒測序及制備

            2-3

            轉(zhuǎn)染

            慢病毒侵染

            2-3

            單克隆細(xì)胞制備

            單克隆細(xì)胞稀釋培養(yǎng)、篩選、PCR鑒定、獲得基因敲除單克隆細(xì)胞株

            5-8

            鑒定

            測序鑒定

            2-3

            送貨

            提供項(xiàng)目COA、穩(wěn)定克隆

             

             

            案例展示:
            1.構(gòu)建慢病毒載體的crispr sgRNA的單質(zhì)粒系統(tǒng)。
            2.經(jīng)過293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染,包裝得到慢病毒。
            3.通過慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式感染目的細(xì)胞。
            4.通過抗生素篩選和單克隆挑取后,擴(kuò)大培養(yǎng)。
            5.經(jīng)挑取單克隆細(xì)胞后,提取得到單克隆細(xì)胞的基因組DNA,再通過PCR擴(kuò)增目的基因編輯位點(diǎn)的上下游區(qū)段,經(jīng)過TA克隆連接到PMD19T的載體上,進(jìn)行測序驗(yàn)證,選取10個菌落測序鑒定得到單克隆的細(xì)胞是否單一。
            下圖是交付給客戶的單克隆細(xì)胞驗(yàn)證結(jié)果。

             

            T7E1酶切法突變體檢測試驗(yàn)檢測CRISPR/Cas9的編輯效率:
            賽爾瑞成采用T7E1酶切法突變體檢測試驗(yàn)檢測CRISPR/Cas9的編輯效率。若sgRNA有效編輯了基因組DNA,則目的基因在修復(fù)后會出現(xiàn)堿基缺失突變現(xiàn)象,通過分析T7E1酶處理目標(biāo)DNA片
            段的雜合鏈后的情況,從而驗(yàn)證Cas/sgRNA的編輯效率,用于篩選編輯效率高的sgRNA。

             

             

            公司簡介:

             

            賽爾瑞成(北京)生命科學(xué)技術(shù)有限公司建有專業(yè)的分子生物學(xué)平臺、原核發(fā)酵平臺、哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)平臺、蛋白純化和制劑平臺。賽爾瑞成能進(jìn)行重組蛋白、多克隆抗體、單克隆抗體、基因工程抗體(包括納米抗體、單鏈抗體、雙特異抗體等)、細(xì)胞治療產(chǎn)品的研發(fā)工作。賽爾瑞成匯聚了一批分子生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物工程等方面的專家,技術(shù)團(tuán)隊(duì)成員均來自國內(nèi)外科研院所和生物技術(shù)企業(yè),擁有雄厚的研發(fā)實(shí)力和產(chǎn)品開發(fā)經(jīng)驗(yàn)。
             

            實(shí)驗(yàn)室建設(shè):

            本產(chǎn)品僅作為科研試劑使用!

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