狠狠色丁香久久综合婷婷亚洲成人福利在线-欧美日韩在线观看免费-国产99久久久久久免费看-国产欧美在线一区二区三区-欧美精品一区二区三区免费观看-国内精品99亚洲免费高清

            賽爾瑞成(北京)生命科學(xué)技術(shù)有限公司

            中級(jí)會(huì)員·8年

            聯(lián)系電話

            18513354055

            您現(xiàn)在的位置: 賽爾瑞成(北京)生命科學(xué)技術(shù)有限公司>>分子生物學(xué)試劑>> CR3002快速T4 DNA連接酶 T4 DNA Ligase (Rapid)
            CR3002快速T4 DNA連接酶 T4 DNA Ligase (Rapid)
            參考價(jià)460
            具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
            • CR3002 型號(hào)
            • 賽爾瑞成 品牌
            • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
            • 北京市 所在地

            規(guī)格
            200000U460元100 支 可售

            訪問(wèn)次數(shù):251更新時(shí)間:2024-12-03 10:58:37

            聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!
            產(chǎn)品簡(jiǎn)介
            純度 95% 供貨周期 現(xiàn)貨
            規(guī)格 200000U 貨號(hào) CR3002
            應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
            快速T4 DNA連接酶 T4 DNA Ligase (Rapid)催化雙鏈DNA或RNA上相鄰的5'-磷酸末端和3'-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化平齊末端或粘性末端之間的連接,還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA 雜交雙鏈中的單鏈切刻。
            產(chǎn)品介紹

            產(chǎn)品概述 
            T4 DNA Ligase催化雙鏈DNA或RNA上相鄰的5'-磷酸末端和3'-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化平齊末端或粘性末端之間的連接,還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA 雜交雙鏈中的單鏈切刻。 

             

            產(chǎn)品組分 
            T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl)

             

            來(lái)源 
            克隆有來(lái)自T4噬菌體DNA Ligase基因的重組E. coli菌株。

             

            保存條件 
            -30 ~ -15℃保存,≤0℃運(yùn)輸。 

             

            單位定義 
            1單位指在50 μl 1 × T4 DNA連接酶反應(yīng)緩沖液中,23℃反應(yīng)條件下,30分鐘能使50% 的經(jīng)HindⅢ消化的λDNA片段(100 ng)連接所需的酶量。 

             

            反應(yīng)緩沖液 
            2× Rapid Ligation Buffer 
            132 mM Tris-HCI pH 7.6 @ 25°C 
            20 mM MgCl2 
            2 mM DTT 
            2 mM ATP 
            15% PEG 6,000 
            10 × T4 DNA Ligase Buffer 
            500 mM Tris-HCI pH 7.6 @ 25°C 
            100 mM MgCl2 
            50 mM DTT 
            10 mM ATP 

             

            注意事項(xiàng) 
            1. 建議插入片段與載體的摩爾比應(yīng)在3:1 - 10:1。 
            2. 平末端載體與片段進(jìn)行連接時(shí),應(yīng)首先將載體進(jìn)行去磷酸化處理,防止其自身環(huán)化。 
            3. dA-Tailing產(chǎn)物與DNA Adapter的摩爾濃度比在1:10 - 1:20。 
            4. T4 DNA Ligase不穩(wěn)定,使用時(shí)冰上操作,用完立即放回-20℃。 

             

            實(shí)驗(yàn)案例1: DNA片段和載體DNA的連接 
            1. 在微量離心管中配制如下連接反應(yīng)體系: 

            ddH2O

            to 10 μl

            10 × T4 DNA Ligase Buffer

            1 μl

            插入片段a

            0.3 pmol

            載體DNAb

            0.03 pmol

            T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl)

            0.5 μl

            a. 插入片段與載體的摩爾比應(yīng)在3:1 - 10:1。 
            b. 平末端載體與片段進(jìn)行連接時(shí),應(yīng)首先將載體進(jìn)行去磷酸化處理,防止其自身環(huán)化。

            2. 16°C過(guò)夜反應(yīng) 
            3. 轉(zhuǎn)化 
            4. 將連接產(chǎn)物加入到100 μl感受態(tài)細(xì)胞中(連接產(chǎn)物的體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的1/6),輕輕彈勻,冰上孵育30 min。 
            5. 將離心管置于42°C水浴,不要晃動(dòng),準(zhǔn)確熱激90 sec后,立刻置于冰水浴中,靜置2 - 3 min。 
            6. 向離心管中加入900 μl LB或SOC培養(yǎng)基,150 rpm,37°C振蕩培養(yǎng)45 min,使菌體復(fù)蘇,抗性基因表達(dá)。 
            7. 5,000 rpm(2,500 × g)離心5 min,去掉900 μl上清。用剩余培養(yǎng)基將菌體重懸,用無(wú)菌涂布棒在含有正確抗性的平板上輕輕涂勻。室溫正置10 min。 
            8. 待菌液被平板吸收后,37°C倒置培養(yǎng)過(guò)夜。 

            ▲如果使用超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞(轉(zhuǎn)化效率>10cfu/μg),可直接吸取100 - 200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4°C保存,一周之內(nèi)都可重新涂板。 

             

            實(shí)驗(yàn)案例2: DNA文庫(kù)構(gòu)建中接頭連接反應(yīng) 
            1. 在微量離心管中配制如下連接反應(yīng)體系: 

            dA-Tailing產(chǎn)物a

            10 μl

            2 × Rapid Ligation Buffer

            15 μl

            DNA Adapter b

            2.5 μl

            T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl)

            1 μl

            ddH2O

            1.5μl

            用移液器輕輕吹打混勻 
            a. 產(chǎn)物為5'端磷酸化,3'端帶dA的DNA片段。 
            b. dA-Tailing產(chǎn)物與DNA Adapter的摩爾濃度比在1:10 - 1:20。 

             

            2. 在PCR儀中進(jìn)行連接反應(yīng): 

            30°C

            10 min

            4°C

            Hold

            反應(yīng)結(jié)束后,立即進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)。 


            產(chǎn)品目錄

            貨號(hào)

            產(chǎn)品名稱

            規(guī)格

            目錄價(jià)格

            CR3001

            T4 DNA Ligase (Rapid) 

            (2000 U/μl)

            40000U

            125

            CR3002

            T4 DNA Ligase (Rapid)

             (2000 U/μl)

            200000U

            460

            注:小包裝需加收干冰費(fèi)用

             

             



             




            會(huì)員登錄

            ×

            請(qǐng)輸入賬號(hào)

            請(qǐng)輸入密碼

            =

            請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

            收藏該商鋪

            X
            該信息已收藏!
            標(biāo)簽:
            保存成功

            (空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

            常用:

            提示

            X
            您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
            產(chǎn)品對(duì)比 二維碼 在線交流

            掃一掃訪問(wèn)手機(jī)商鋪

            對(duì)比框

            在線留言