人膀胱癌順鉑耐藥株BIU-87/DDP生長條件：
培養(yǎng)條件 | 90%DMEM（高糖）+10%FBS+1%雙抗 |
溫度 | 37℃ |
空氣條件 | 5% CO2，,95% AIR |
傳代方法 | 1:2傳代，2~3天換液 |
凍存條件 | 90%FBS+10%DMSO |
人腎上腺素能α2A、尿激酶受體(u-PAR)、維生素D(中度表達)、尿激酶受體(u-PAR)；維生素D(中度表達)、人腎上腺素能α2A
Myc+；ras+；Myb+；Fos +；SIS+；P53 +；ABL-；ROS -；SRC--
IgA分泌成分；carcinoembryonic antigen（CEA）；轉化生長因子-β結合蛋白；黏蛋白
是的，在裸鼠體內；形成與結腸原發(fā)性（I級）*的高分化腺癌；腫瘤也形成于激素治療的倉鼠體內。
細胞角蛋白+，細胞角蛋白-7-，細胞角蛋白-8+，細胞角蛋白-17-，細胞角蛋白-18+，細胞角蛋白-19+，結蛋白-，內皮-，EpCAM+，GFAP-，HMB-45-，神經絲-，波形蛋白
產品相冊產品圖片：
1、您收到人膀胱癌順鉑耐藥株BIU-87/DDP后，請按照以下方法進行操作：
取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
2、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，*后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
人膀胱癌順鉑耐藥株BIU-87/DDP發(fā)貨方式：
復蘇后發(fā)貨：我們復蘇細胞后發(fā)貨，貨期一周左右，免運費。（氣溫較好建議復蘇后發(fā)貨）
凍存發(fā)貨(干冰運輸）：需額外增加干冰運費，選擇干冰運輸?shù)奈覀儼l(fā)兩管細胞，為了保證客戶接種可靠性多發(fā)一管。（氣溫低于0℃須凍存發(fā)貨）
細胞發(fā)貨采取專業(yè)的運輸包裝，并選擇*快捷的運輸方式（順豐速運或其他空運快遞）
本公司細胞引種來源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大細胞庫、上海生化細胞所、中國科學院典型培養(yǎng)物保藏委員會等
細胞處理方法：
一、貼壁細胞
1、 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、37度平衡1-2小時。
5、用移液管吸取培養(yǎng)基，到50ml離心管中，剩下細胞密度達到80%至90%可以傳代，如沒有達到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
6、如果肉眼檢查上清有細胞，對50ml上清進行離心收集細胞，如果細胞連片狀態(tài)，棄掉上清對收集的細胞進行胰酶消化（1ml胰酶37度），接種培養(yǎng)。
二、懸浮細胞
1、接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒）。
5、1000rpm，5min 離心，用吸管小心吸出上清，加入培養(yǎng)基，重懸細胞。
6、將重懸好的細胞轉入六孔板或者細胞培養(yǎng)瓶種，加入新鮮培養(yǎng)基，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)（大部分細胞）。
培養(yǎng)操作：華拓細胞培養(yǎng)操作指南
細胞常見問題分析：細胞培養(yǎng)常見問題分析
細胞在發(fā)貨前進行質檢：
1、細胞存種的活性檢測
2、細菌、真菌、霉菌污染物鏡檢
3、衣原體、支原體檢測（熒光法、培養(yǎng)法等）
產品質量保證及售后：
1、 細胞為三代以內，活體。運輸過程中細胞出現(xiàn)污染和狀態(tài)不好，我們*免費重新發(fā)貨。
2、 實驗過程中若確定是客戶問題，客戶僅需支付物流和耗材費用，我們可重新發(fā)貨。其他根據情況靈活處理。
3、 產品使用過程中，華拓生物可提供技術上的指導。
注意事項
人膀胱癌順鉑耐藥株BIU-87/DDP
一，燒瓶培養(yǎng)的處理程序
在培養(yǎng)瓶中接種細胞并在培養(yǎng)基中*填充培養(yǎng)基以防止運輸過程中細胞的丟失。
1、收到后，目視檢查培養(yǎng)物是否有微生物污染的宏觀證據。
使用倒置顯微鏡（配備有相位傳感器），仔細檢查是否有微生物污染的證據。還檢查以確定大多數(shù)細胞是否仍然附著在燒瓶底部？在運輸過程中，培養(yǎng)物有時被粗略地處理，并且許多細胞經常分離并懸浮在培養(yǎng)基中（但仍然是可行的）。
2、如果細胞仍然附著，無菌去除5至10毫升的運輸介質?？梢怨?jié)省運輸媒介以重復使用。在5%℃的空氣中，在37℃下培養(yǎng)細胞，直到它們準備進行傳代培養(yǎng)。
3.如果細胞沒有附著，無菌地移除燒瓶的全部內容物，并以1000rpm離心5至10分鐘。取出運輸介質并保存。在10毫升這種培養(yǎng)基中重新沉淀顆粒細胞并加入25厘米的燒瓶中。在空氣中5%℃下，在37℃下孵育，直至細胞準備進行傳代培養(yǎng)。
二、傳代程序
體積為75厘米的燒瓶。增加或減少其他尺寸培養(yǎng)容器所需的分離培養(yǎng)基的量。
1、去除和丟棄培養(yǎng)基。
2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液沖洗細胞層，除去所有含有胰蛋白酶抑制劑的血清痕跡。
3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中，倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層分散（取決于胰蛋白酶的批）。
注意：為了避免結塊，不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞，等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。
4、加入6～8毫升的完整生長培養(yǎng)基，輕輕吸液，抽吸細胞。
5、在新培養(yǎng)容器中加入適當?shù)募毎麘乙旱确衷嚇印?/p>
6、培養(yǎng)37°C培養(yǎng)基。
推薦栽培比為1:3∶1:4。
介質更新：每周2至3次
三、冷凍保存程序
該協(xié)議使用量在75平方厘米的瓶；比例減少或增加的其他尺寸的分離介質的培養(yǎng)容器的數(shù)量。
1、去除和丟棄培養(yǎng)基。
2。簡要沖洗細胞層0.25（w/v）trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕跡血清含有胰蛋白酶抑制劑。
3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中，倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層是分散的（通常在1到10分鐘）。
注意：為了避免結塊，不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞，等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。
4、加入6～8毫升的完整生長培養(yǎng)基，輕輕吸液，抽吸細胞。
5。去除胰酶EDTA溶液，將細胞懸液到離心管和旋轉約5 1000rpmfor 10分鐘。
6、低溫保存培養(yǎng)液中的上清液和復蘇細胞。
7、將細胞轉移至低溫瓶，1ml／瓶。
8、低溫容器中的細胞Frozen（NalgENα5100-01）。
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