實(shí)驗前：

　　1.對實(shí)驗器皿的準(zhǔn)備：對玻璃器皿進(jìn)行清洗，將洗凈干燥的平皿、乳缽、刻度吸管等用牛皮紙包裹，放入鼓風(fēng)干燥箱中于160℃干熱滅菌2小時或放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘，備用。

　　2.對實(shí)驗用培養(yǎng)基及稀釋液的準(zhǔn)備：按規(guī)定比例配制實(shí)驗所需的各種培養(yǎng)基及稀釋液，包好，放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘，備用。

　　3.潔凈服的準(zhǔn)備：將當(dāng)天實(shí)驗所用潔凈服放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘，備用。
實(shí)驗中：

　　1.將實(shí)驗所需器皿、培養(yǎng)基、潔凈服、樣品、稀釋液放入相應(yīng)的傳遞窗中，打開紫外燈，照射30分鐘。

　　2.打開潔凈室的通風(fēng)設(shè)備1小時以上，觀察潔凈室各個規(guī)定區(qū)域的壓差是否符合相應(yīng)規(guī)定范圍，若不符合，則應(yīng)通知設(shè)備部門及時進(jìn)行調(diào)整。

　　3.進(jìn)入潔凈室，換上工作鞋，用洗手液洗手，烘干，換上潔凈服，戴上口罩、手套，并與噴手器下用75%乙醇或0.1%新潔爾滅對雙手進(jìn)行消毒。

　　4.進(jìn)入萬級潔凈走廊，觀察各個規(guī)定房間的溫度、濕度、壓差是否符合規(guī)定，并與傳遞窗中將經(jīng)紫外燈照射后的樣品、器皿稀釋液及培養(yǎng)基，放入相應(yīng)的實(shí)驗室(如微生物限度檢查室或無菌檢查室)。并將培養(yǎng)基的溫度控制在45℃以下(若培養(yǎng)基出現(xiàn)凝固現(xiàn)象時，因微波爐加熱融化;若溫度太高時，則應(yīng)用純化水降溫至不燙手背宜。
5.打開超凈工作臺的紫外燈，照射30分鐘，然后再打開超凈工作臺的通風(fēng)設(shè)備。用75%乙醇或0.1%新潔爾滅對實(shí)驗所用工作臺面進(jìn)行擦拭消毒(消毒時應(yīng)遵循由里到外，由上到下，由潔凈要求高到潔凈要求低的原則)。

　　6.按照適宜的次序于超凈工作臺內(nèi)擺放好稀釋液、天平、消毒液、集菌儀、剪刀、鑷子等物品，用75%酒精棉球進(jìn)行消毒，將樣品內(nèi)包裝表面用碘酒棉球以及75%酒精棉球依次進(jìn)行消毒。將營養(yǎng)瓊脂平板與超凈工作臺的左、中、右各置一個(平板需經(jīng)下預(yù)培養(yǎng)48小時且無菌生長)，開蓋暴露30min，測定的沉降菌每平板不得超過1cfu，則符合百級超凈工作臺的沉降菌標(biāo)準(zhǔn)(注：在潔凈工作臺進(jìn)行操作時，為防止污染，應(yīng)用酒精棉球?qū)﹄p手反復(fù)消毒)。

　　7.樣品處理(以采用離心薄膜過濾法為例)：　用天平稱取規(guī)定量的樣品，置于乳缽中，碾碎，少量幾次加入規(guī)定量(用滅好菌的兩頭高量取)的稀釋液，研磨均勻，以制備供試液。8.細(xì)菌的檢查：用滅菌吸管吸取規(guī)定量的供試液于離心管中，500轉(zhuǎn)/秒，離心3分鐘。離心后用注射器吸取規(guī)定量的上清液于集菌儀中(集菌儀中的濾膜應(yīng)事先用少量的蛋白胨溶液進(jìn)行潤洗)，再用規(guī)定量的蛋白胨溶液進(jìn)行反復(fù)沖洗(每次沖洗量不得超過100ml，每張濾膜的總的沖洗量不得超過1000ml，且沖洗過程中應(yīng)該保持濾膜的完整性)。并用等量的蛋白胨溶液制備陰性對照的濾膜。