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            提高細胞轉(zhuǎn)染效率的方法

            時間:2020/8/14閱讀:1248
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            1.選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑

               不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要,因此在轉(zhuǎn)染實驗前應(yīng)根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻,通過這些資料可選擇適合實驗設(shè)計的轉(zhuǎn)染試劑。當(dāng)然,適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉(zhuǎn)染試劑。

            2.保持佳的細胞狀態(tài)

               一般低的細胞代數(shù)(<50)能?;蛐筒蛔?。適合轉(zhuǎn)染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到指數(shù)生長期的細胞,細胞生長旺盛,容易轉(zhuǎn)染。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細胞行為的變化。也就是說同一種系的細胞株,在各實驗室不同培養(yǎng)條件下,其生物學(xué)性狀發(fā)生不同程度的改變,導(dǎo)致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化。因此,如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低,可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復(fù)較佳結(jié)果。

            3.選擇高效的轉(zhuǎn)染方法

               不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法,但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法,但也要注意,因不同實驗室培養(yǎng)的細胞性質(zhì)不同,質(zhì)粒定量差異,操作手法上的差異等,其轉(zhuǎn)染效果可能不同,應(yīng)根據(jù)實驗室的具體條件來確定較佳轉(zhuǎn)染條件。

            4.所構(gòu)建載體的質(zhì)量。

                轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建(病毒載體,質(zhì)粒DNA,RNA,pcr產(chǎn)物,寡核苷酸等)也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對特定宿主細胞感染效率較高,但不同病毒載體有其特定的宿主,有的還要求特定的細胞周期,如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細胞,此外還需考慮一些安全問題(如基因污染)。除載體構(gòu)建外,載體的形態(tài)及大小對轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響,如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對細胞有毒性作用,轉(zhuǎn)染也很難進行,因此選擇組成或可調(diào)控,強度合適的啟動子也很重要,同時做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對照可排除毒性影響的干擾。

             

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