實驗過程

(1)標準品的稀釋與加樣:標準品按照說明書稀釋好五個梯度，各個梯度每孔加樣量都為50μL;

(2)加樣:分別設空白孔、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40uL，然后再加待測樣品10uL。加樣將樣品加干酶標板孔底部，盡最不觸及孔壁，輕輕晃動混勻;

(3)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30min ;

(4)配液洗滌:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜詈30sec后棄去，如此重復5次，拍干:

(5)加酶:每孔加入酶標試劑50uL，空白孔除外;

(6)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30min ;

(7)洗滌:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30sec后棄去，如此重復5次，拍干;

(8)顯色:每孔先加入顯色劑A50pL，再加入顯色劑B50uL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15min;

(9)終止:每孔加終止液50uL，終止反應;

(10)測定:以空白空調(diào)零，450nm波長依序測是各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15min以內(nèi)進行。