實(shí)驗(yàn)過程

(1)標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:標(biāo)準(zhǔn)品按照說明書稀釋好五個(gè)梯度，各個(gè)梯度每孔加樣量都為50uL ;

(2)加樣:分別設(shè)空白孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40uL，然后再加待測(cè)樣品10uL。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻;

(3)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30min;

(4)配液洗滌:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用;小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30sec后棄去，如此重復(fù)5次，拍干;

(5)加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50uL，空白孔除外;

(6)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30min ;

(7)洗滌:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30sec后棄去，如此重復(fù)5次，拍干;

(8)顯色:每孔先加入顯色劑A50uL，再加入顯色劑B50uL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15min;

(9)終止:每孔加終止液50uL，終止反應(yīng);

(10)測(cè)定:以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15min以內(nèi)進(jìn)行。

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