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            伊萊博生物科技(上海)有限公司
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            流式ROS檢測實驗服務

            參   考   價: 200

            訂  貨  量: ≥10 件

            具體成交價以合同協(xié)議為準

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            品       牌其他品牌

            廠商性質代理商

            所  在  地上海市

            更新時間:2024-06-17 13:28:40瀏覽次數(shù):444次

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            活性氧(ROS)的流式檢測通常是通過使用熒光探針如DCFH-DA來監(jiān)測細胞內活性氧水平的變化。

            01選擇熒光探針常用的熒光染料是DCFH-DA,它能夠進入細胞并在細胞內被酯酶水解成DCFH。DCFH隨后可以被細胞內的活性氧氧化,生成發(fā)熒光的DCF。

            02DCFH-DA是一種用于檢測活性氧ROS的熒光探針,全稱為2,7-二氯熒光素二乙酸酯。其工作原理為:DCFH-DA本身沒有熒光,但可以自由穿過細胞膜,一旦進入細胞,它會被細胞內的酯酶水解成DCFH,由于DCFH無法穿過細胞膜,因此熒光探針會在細胞內積聚。細胞內的ROS能夠氧化無熒光的DCFH,生成有熒光的DCF,且熒光強度與ROS水平成正比。通過熒光顯微鏡、流式細胞儀或激光共聚焦顯微鏡等設備,在最大激發(fā)波長480nm和最大發(fā)射波長525nm下檢測熒光信號。

            03步驟裝載探針

            對于刺激時間較短(通常為2小時以內)的細胞,先裝載探針,后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞。對于細胞刺激時間較長(通常為6小時以上)的細胞,先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞,后裝載探針。

            原位裝載探針:本方法僅適用于貼壁培養(yǎng)細胞。按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA,使終濃度為10微摩爾/升。去除細胞培養(yǎng)液,加入適當體積稀釋好的DCFH-DA。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜,通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA不少于1毫升。37℃細胞培養(yǎng)箱內孵育20分鐘。用無血清細胞培養(yǎng)液洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。通?;钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ毎?0-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。

            收集細胞后裝載探針:按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA,使終濃度為10微摩爾/升。細胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中,細胞濃度為一百萬至二千萬/毫升,37℃細胞培養(yǎng)箱內孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下,使探針和細胞充分接觸。用無血清細胞培養(yǎng)液洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。直接用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞,或把細胞等分成若干份后刺激細胞。通常活性氧陽性對照在刺激細胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。



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