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JC-1線粒體膜電位熒光探針染色步驟(流式細胞儀法):
1. 于6-,12或24-孔板上進行細胞鋪板,密度為5×105 cells/mL。37℃,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。選擇合適的化合物根據特定的步驟進行凋亡誘導。 注:進行凋亡誘導時的細胞密度建議不超過1×106 cells/mL,也可根據自己的細胞類型培養(yǎng)至合適的密度。
2. 取0.5 mL細胞懸液至無菌的離心管內;
3. 室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清。
4. 用0.5 mL JC-1工作液重懸細胞,于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min;注意:一般情況,15 min足以進行充分的染色。
5. 室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清;
6. 用2 mL細胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞,之后室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清;
7. 重復步驟6);
8. 用0.5 mL新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞,即可進行后續(xù)的流式分析。注意:請馬上進行流式定量分析,此細節(jié)很重要。
數據分析:含有紅色JC-1聚集物的健康細胞線粒體用FL2通道檢測;含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細胞用FL1(FITC)通道檢測。
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