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            伊萊博生物科技(上海)有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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            流式檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度

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            品       牌其他品牌

            廠商性質(zhì)代理商

            所  在  地上海市

            更新時(shí)間:2024-06-17 13:25:52瀏覽次數(shù):561次

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            流式檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度 流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量鈣離子的熒光探針大都是鈣螯合劑EDTA的衍生物,有較高的量子產(chǎn)量,并對(duì)鈣有較高的特異性親合力。鈣離子流式熒光探針本身不能透過細(xì)胞質(zhì)膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),將它們連潔乙酰甲酯后,可將染料導(dǎo)入細(xì)胞,經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的非特異性酯酶水解水解該酯鍵,釋放出染料分子,恢復(fù)為不能通過細(xì)胞膜的游離酸形式,進(jìn)而與細(xì)胞內(nèi)鈣結(jié)合。通過熒光強(qiáng)度可以敏感地檢測(cè)出鈣離子濃度。

            1.Fluo/Am儲(chǔ)存液配制:將Fluo/Am溶于DMSO,配成終濃度為2mmol/L的儲(chǔ)存液,分裝,-70度凍存。
            2.懸浮細(xì)胞染色:收集細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞濃度至2*10^6個(gè)/ml,加Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L,置于,5%CO2。37度避光,孵育30-60min,其間輕輕振蕩幾次,并設(shè)置陰性對(duì)照(不加Fluo/Am)。
            3.貼壁細(xì)胞染色:以5*10^5個(gè)細(xì)胞種植于24孔培養(yǎng)板中,置于5%CO2。37度培養(yǎng)一段時(shí)間,加入Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L,置于5%CO2。37度避光,孵育30-60min。其間輕輕振蕩幾次,并設(shè)置陰性對(duì)照。
            4.取出細(xì)胞或消化細(xì)胞,離心1500r/min 10min,去除多余染料,再用無(wú)鈣緩沖液沖洗PBS反復(fù)離心洗滌2次,最后用無(wú)鈣PBS重懸至0.5ml。
            5.進(jìn)行流式檢測(cè)分析
            結(jié)果分析:用488mm激發(fā),F(xiàn)LI-H熒光通道收集熒光信號(hào),收集1*10^4個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)鈣的濃度用平均熒光表示。



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