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腦損傷動(dòng)物模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)方法：

(1)復(fù)制方法 健康雄性大鼠，體重為230～260g。對(duì)于腦損傷動(dòng)物模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)采用改進(jìn)的Feeney自由落體硬膜外撞擊方法。損傷裝置由底板、固定支架、垂直導(dǎo)桿、下落擊錘和聚乙烯撞擊圓錐組成。撞擊圓錐頭端直徑為4mm、高為2.5mm。經(jīng)腹腔注射水合氯醛(按350～400mg/kg體重的劑量)麻醉。將其頭部固定于立體定向儀上，剪去頂部毛發(fā)，手術(shù)區(qū)域皮膚消毒。沿中線左側(cè)切開(kāi)頭皮，分離骨膜，用牙科鉆于中線旁2mm、緊挨冠狀縫后開(kāi)一直徑5mm的圓形窗，硬膜保持完整。用20g砝碼于10cm和30cm高處通過(guò)一金屬導(dǎo)桿墜落，撞擊置于硬膜上的圓錐上致輕、中型損傷，另用40g砝碼于25cm高處墜落致重型損傷。輕、中、重三型損傷的致傷沖擊力分別為200g·cm、600g·cm和1000g·cm，用鋅汀粉封閉骨窗，縫合頭皮，置鼠籠喂養(yǎng)。

(2)檢測(cè)指標(biāo)1)腦含水量測(cè)定 動(dòng)物斷頭處死后，30s內(nèi)取出大腦，用濾紙吸盡腦表面血液后，銳性分離左側(cè)頂葉皮質(zhì)約100mg，用電子分析天平稱濕重后，置于110℃恒溫干燥箱內(nèi)烤干(24h)，稱干重。用Elliot公式計(jì)算各部位腦含水量百分率：腦含水量(％)＝[(濕重－干重)/濕重]×100％2)血腦屏障定量測(cè)定 動(dòng)物于損傷前1h注射2％伊文斯藍(lán)(3ml/kg體重)。在取腦組織前，為清除血液中染料，可用生理鹽水經(jīng)左心室灌注至右心室流出清亮液體為止。取損傷側(cè)皮質(zhì)分別稱重，加入二倍體積的二甲基甲酰胺，50℃水浴中孵育72h，1500g離心，離心10min，取上清液。應(yīng)用分光光度計(jì)在伊文斯藍(lán)大吸收光譜635mm處檢測(cè)吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得伊文斯藍(lán)含量，結(jié)果以μg/g腦組織表示。

3)病理學(xué)觀察 損傷后24h再次麻醉，經(jīng)升主動(dòng)脈快速灌注生理鹽水150ml，繼之快速灌注冰冷的4％多聚甲醛200ml，隨后再用其300ml在2h內(nèi)慢速灌注，取腦組織浸入4％多聚甲醛內(nèi)4℃后固定48h，常規(guī)乙醇脫水，石蠟包埋，行5μm冠狀切片，作HE染色及尼氏小體染色，光鏡下觀察。若采用透射電鏡觀察者，灌注液為4％多聚甲醛和2％戊二醛/0.1MPB(pH7.4)，隨后浸入2％戊二醛/0.1MPB(pH7.4)內(nèi)，4℃固定過(guò)夜。常規(guī)脫水，環(huán)氧樹(shù)脂包埋，超薄切片，醋酸鉛鈾染色，透射電鏡觀察。