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            中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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            TUNEL檢測(cè)組織切片白光
            • TUNEL檢測(cè)組織切片白光

            貨物所在地:上海上海市

            地: 上海市寶山區(qū)高境鎮(zhèn)

            更新時(shí)間:2025-01-22 21:00:25

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            細(xì)胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個(gè)漸進(jìn)的分階段的過(guò)程,染色體DNA首先在內(nèi)源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300kb的大片段。

            石蠟切片tunel實(shí)驗(yàn)步驟

            1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯I15min-二甲苯Ⅱ15min-無(wú)水乙醇I5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。

            2、 修復(fù): 切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈,在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液覆蓋組織,37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。

            3、 破膜:切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織,常溫下孵育20min,將玻片置于PBS中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。

            4、 加試劑1,2 :按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1和試劑2按2:29混合,加到圈內(nèi)覆蓋組織,切片平放于濕盒內(nèi),37℃水浴鍋孵育2小時(shí),濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。

            5、DAPI復(fù)染細(xì)胞核:切片用PBS(PH7.4)洗滌3次,每次5min。去除PBS后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。

            6、封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

            7、 鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。


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