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            瑞氏絳蟲通用PCR檢測試劑盒試劑準備步驟

            閱讀:1059          發(fā)布時間:2021-3-25

            瑞氏絳蟲通用PCR檢測試劑盒試劑準備步驟:

            1. DNA模板

            2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)

            3.10×PCR Buffer

            4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

            5.Taq酶操作步驟 

            1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

                  10×PCR buffer             5μl

                  dNTP mixl                 4μl

                   引物1(10pM)               2μl

                   引物2(10PM)              2μl

                   Taq酶(2U/μl)            1μl

                  DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl

                  加ddH2O至               50 μl

                視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

            2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。

            3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

            4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

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