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            上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>熒光定量PCR檢測試劑盒>>50T輕型鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

            輕型鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

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            • 輕型鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

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            • 型號(hào) 50T
            • 品牌 其他品牌
            • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
            • 所在地 上海市

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            更新時(shí)間:2020-06-02 11:34:42瀏覽次數(shù):643

            聯(lián)系我們時(shí)請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

            產(chǎn)品簡介

            CAS 詳見說明書 純度 詳見說明書
            分子量 詳見說明書 分子式 詳見說明書
            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
            貨號(hào) CP934749 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
            主要用途 公司產(chǎn)品僅用于科研    
            輕型鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

            詳細(xì)介紹

            注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

            產(chǎn)品名稱

            輕型鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

            英文名稱

            Streptococcus mitis

            貨號(hào)

            CP934749

            儲(chǔ)存條件:

            14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
            1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
            2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
            3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
            4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
            5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

            探針法:

            輕型鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對(duì)。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對(duì)時(shí),熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí),聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切,使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對(duì)于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
            使用方法:
            一、樣品DNA的制備
            用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
            二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對(duì)照。
            1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號(hào)。
            2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
            3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
            4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
            5. 換槍頭,從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。
            6. 換槍頭,從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
            7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
            8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR(見下步),每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
            探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

            應(yīng)用案例:
            樣品 DNA 的制備
            1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
            稀釋陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對(duì)照。
            2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
            3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
            4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
            6.換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
            7.換槍頭,在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 4 號(hào)管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
            8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20  μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
            9.在 PCR 管中加入下列成分。
            以下是公司正在銷售的產(chǎn)品:

            PMP2  周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2抗體大鼠CDP-甘油二酯--甘油-3-酸3脂酰轉(zhuǎn)移酶,線粒體(PGS1)ELISA試盒

            PML/TRIM19  早幼粒細(xì)胞白血病蛋白抗體大鼠CDCP1 ELISA試盒

            PMCA4B  細(xì)胞膜鈣ATP酶4B抗體大鼠CD8分子(CD8)ELISA試盒

            PMCA4/Calcium Pump PMCA4 ATPase  細(xì)胞膜鈣ATP酶4抗體大鼠CD68分子(CD68)ELISA試盒

            PMCA1  細(xì)胞膜鈣ATP酶1抗體大鼠CD63分子(CD63)ELISA試盒

            輕型鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒PMCA  細(xì)胞膜鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶抗體大鼠CD4分子(CD4)ELISA試盒

            PMA/Prostate Mucin Antigen  前列腺粘蛋白抗原抗體大鼠CD45分子(CD45)ELISA試盒

            Plzf  早幼粒細(xì)胞白血病鋅指蛋白抗體大鼠CD44分子(CD44)ELISA試盒

            PLTP  脂轉(zhuǎn)移蛋白抗體大鼠CD34分子(CD34)ELISA試盒

            PLSCR3  脂爬行酶3抗體大鼠CD30分子(CD30)ELISA試盒

            PLRP1/PNLIPRP1  胰脂肪酶相關(guān)蛋白1抗體大鼠CD19分子(CD19)ELISA試盒

            PLK5  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶5抗體大鼠CD117分子(CD117)ELISA試盒

            PLK4/STK18  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶18大鼠CC趨化因子受體9(CCR9)ELISA試盒

            PLK1  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體大鼠C-C趨化因子6(CCL6)ELISA試盒

            PLGLB2  纖溶酶相關(guān)蛋白B2抗體大鼠CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)ELISA試盒生物素化山羊抗親和素Biotin Goat Anti Avidin Ab-20℃保存0.5mg

            生物素化的牛血清白蛋白Biotin-BSA-20℃保存25mg

            生物素化的辣根過氧化物酶Biotin-HRP-20℃保存5mg

            生物素化的性酸酶(AP)Biotin-AP-20℃保存1mg

            生物素化的β- 半乳糖苷酶Biotin-β-Galctosidase-20℃保存100U

            生物素化蛋白LBiotin-Protein L-20℃保存0.5mg

            生物素化蛋白GBiotin-Protein G-20℃保存0.5mg

            生物素化蛋白ABiotin-Protein A-20℃保存1mg

            生物素標(biāo)記的Oligo(dT)Biotinylated Oligo (dT)常溫5ug

            生物素標(biāo)記dUTP溶液(1mM)Biotin-11-dUTP-20℃保存50uL

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