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            上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒>>50T伊氏錐蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒

            伊氏錐蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒

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            • 型號(hào) 50T
            • 品牌 其他品牌
            • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷(xiāo)商
            • 所在地 上海市

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            更新時(shí)間:2020-06-03 10:39:44瀏覽次數(shù):820

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            產(chǎn)品簡(jiǎn)介

            CAS 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) 純度 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
            分子量 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) 分子式 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
            貨號(hào) CP934846 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
            主要用途 公司產(chǎn)品僅用于科研    
            伊氏錐蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

            詳細(xì)介紹

            產(chǎn)品名稱

            伊氏錐蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒

            英文名稱

            Trypanosoma evansi

            貨號(hào)

            CP934846

            儲(chǔ)存條件:

            14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
            1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
            2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
            3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
            4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
            5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

            探針?lè)ǎ?/span>

            伊氏錐蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對(duì)。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對(duì)時(shí),熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí),聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切,使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來(lái)的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對(duì)于染料法,Taqman探針?lè)ň哂懈叩奶禺愋院蜏?zhǔn)確性。
            使用方法:
            一、樣品DNA的制備
            用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
            二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽(yáng)性對(duì)照。
            1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號(hào)。
            2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
            3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
            4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
            5. 換槍頭,從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
            6. 換槍頭,從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
            7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
            8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
            探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

            應(yīng)用案例:
            樣品 DNA 的制備
            1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購(gòu)本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
            稀釋陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 86bp 的 DN段作為陽(yáng)性對(duì)照。
            2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
            3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
            4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
            6.換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
            7.換槍頭,在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 4 號(hào)管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
            8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20  μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
            9.在 PCR 管中加入下列成分。
            以下是公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品:

            PDCD6/ALG2  凋亡相關(guān)蛋白6抗體伊紅美藍(lán)瓊脂EMB

            PDCD4  凋亡相關(guān)蛋白4抗體培養(yǎng)基

            PDCD2L/MGC13096  程序性細(xì)胞死亡2抗體伊紅美藍(lán)瓊脂平板

            PDCD10  凋亡相關(guān)蛋白10抗體蛋白胨水

            PDC6I/Alix  調(diào)亡誘導(dǎo)因子6相互作用蛋白/多巴胺受體相互作用蛋白4抗體Kovacs 靛基質(zhì)試

            PD-1/CD279  程序性死亡1抗體革蘭染色液

            PCX/PODXL  足細(xì)胞特異蛋白抗體十六基三基化銨培養(yǎng)基

            PCSK9/NARC1  神經(jīng)細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化蛋白1抗體(前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9)酰胺培養(yǎng)基

            PCNT/Pericentrin  中心粒周蛋白抗體綠膿菌素測(cè)定培養(yǎng)基PDP基礎(chǔ)

            PCNP  PEST含核蛋白抗體甘油

            PCNA-Proliferation Marker  增殖細(xì)胞核抗原抗體綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基PDP斜面限供汽運(yùn)

            伊氏錐蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒PCNA(1C11)  小鼠增殖細(xì)胞核抗原單克隆抗體培養(yǎng)基

            PCNA [Proliferation Marker]  增殖細(xì)胞核抗原抗體明膠生化管

            PCNA  增殖細(xì)胞核抗原抗體明膠培養(yǎng)基

            PCNA  增殖細(xì)胞核抗原抗體硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基碘酸Iodoacetic Acid -20℃保存5g

            碘硝基四唑紫嘌呤INT(Iodonitrotetrazolium Chloride)4℃避光保存250mg

            碘化啶干粉PI Powder-20℃干燥避光保存10mg

            碘化啶苯Propidium Iodide4℃保存10mg

            碘代酰胺Iodoacetamide4℃保存5g

            地塞米松溶液,50mg/mLDexamethasone DXM Solution-20℃避光保存1mL

            地塞米松Dexamethasone4℃保存100mg

            標(biāo)記dUTP溶液 (0.35mM)DIG-11-dUTP-20℃保存25uL

            低載量PCR片段純化試盒Mini PCR Clean-Up Kit常溫保存50次

            低載量PCR片段純化試盒Mini PCR Clean-Up Kit常溫保存100次

            注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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