化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
寄生水霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
詳細介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Saprolegnia parasitica |
貨號 | CP934695 |
產(chǎn)品特征:
寄生水霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強：采用熱啟動酶的激活機制，抑制非特異性擴增 。
重復性好：擴增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴增效率高：擴增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是寄生水霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
Rabbit Anti-rat IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗大鼠IgG犬S100B蛋白(S100B)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗大鼠IgG犬P選擇素(SELP)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/PE PE標記的兔抗大鼠IgG犬P物質(zhì)受體(TACR1)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的兔抗大鼠IgG犬N-酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/Gold 膠體金標記的兔抗大鼠IgG犬N端前心鈉肽(NT-ProANP)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/FITC FITC標記的兔抗大鼠IgG犬N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/Cy7 Cy7標記的兔抗大鼠IgG犬KI-67抗原(MKI67)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗大鼠IgG犬I 型膠原蛋白ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/Cy5 Cy5標記的兔抗大鼠IgG犬E選擇素(SELE)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/Cy3 Cy3標記的兔抗大鼠IgG犬C肽(C-Peptide)ELISA試盒
寄生水霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒Rabbit Anti-rat IgG/Bio 生物素標記的兔抗大鼠IgG犬C反應蛋白(CRP)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/APC APC標記的兔抗大鼠IgG犬CD8分子(CD8)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/AP 性酸酶（AP）標記的兔抗大鼠IgG犬CD6分子(CD6)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗大鼠IgG犬CD4分子(CD4)ELISA試盒
Rabbit Anti-rat IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗大鼠IgG犬CD31分子(CD31)ELISA試盒長效期SDS-PAGE上樣液Stable SDS-PAGE Loading Buffer-20℃保存1mL
長效期SDS-PAGE配膠液Stable SDS-PAGE Gel Buffer4℃保存200mL
長效期SDS-PAGE還原SDS-PAGE Reducing Agent4℃保存10mL
長效期SDS-PAGE電泳液（干粉）（適合30 KD以上蛋白）Stable SDS-PAGE Running Buffer常溫保存20L
長效期SDS-PAGE電泳液（干粉）（適合2-30 kD蛋白）Stable SDS-PAGE Running Buffer常溫保存20L
章魚(+)-Octopine -20℃保存25mg
粘附性大腸桿菌PCR檢測試盒低溫運輸，-20℃保存50T
增強型天狼猩紅染色試盒Enhanced Sirius Red Straining Kit常溫保存100mL
增強型DAB顯色試盒Enhanced DAB Chromogenic Kit4℃保存100mL
雜交管(35×300mm)Hybridization Tube常溫1個
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強。預期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結(jié)果。產(chǎn)品僅用于科研