本試劑盒采用雙抗體夾心兩步法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被抗人性激素結合球蛋白(SHBG)抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入人性激素結合球蛋白(SHBG)校準品和待測樣本，再加入shengwusu標記抗體，經(jīng)過溫育與充分洗滌后，再加入HRP偶聯(lián)的親和素，經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-shengwusu標記抗體-親和素酶的夾心復合物。加底物A和B，產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，在終止液作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀450nm波長上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中人性激素結合球蛋白(SHBG)的濃度正相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中人性激素結合球蛋白(SHBG)的濃度。
操作步驟
推薦樣本稀釋方案：建議先做預實驗摸索樣本適合稀釋倍數(shù)，然后再做正式實驗。
所有試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質(zhì)控品和樣品，建議做復孔。
1、按前面說明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
3、設置標準品孔、yangben稀釋液孔、空白孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，yangben稀釋液孔加yangben稀釋液50μL，空白孔不加，樣本孔加待測樣本50μL。除空白孔外，每孔加入shengwusu抗體100uL，用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育60min。
4、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復5次。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。
5、除空白孔外，每孔加入HRP標記親和素100uL，用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育20min。
6、重復步驟4。
7、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育15min。
所有試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質(zhì)控品和樣品，建議做復孔。
1、按前面說明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
3、設置標準品孔、yangben稀釋液孔、空白孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，yangben稀釋液孔加yangben稀釋液50μL，空白孔不加，樣本孔加待測樣本50μL。除空白孔外，每孔加入shengwusu抗體100uL，用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育60min。
4、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復5次。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。
5、除空白孔外，每孔加入HRP標記親和素100uL，用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育20min。
6、重復步驟4。
7、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育15min。
8、所有孔加入終止液50μL，在450nm波長酶標儀上讀取各孔吸光度（OD值）。
備注：圖片僅供參考。僅供科研，不可用于臨床。
化工儀器網(wǎng)